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RD雞干擾素-y試劑盒中文說明書(ELISA方法)

·本試劑僅供研究使用  
·試驗原理：
    IFN-Y試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IFN-Y濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將IFN-Y和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IFN-Y的濃度呈比例關(guān)系。

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·自備材料：
  1.蒸餾水。
  2.加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
  3.振蕩器及磁力攪拌器等。

·樣品收集、處理及保存方法：
  1.血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
  2.血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  3.細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4.組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
  5.保存……如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

·安全性：
  1.避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
  2.實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
  3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

·試劑的準備：
  1.標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
400
pg/ml    （6號標準品）    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
200
pg/ml    （5號標準品）    100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100
pg/ml    （4號標準品）    100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50
pg/ml    （3號標準品）    100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25
pg/ml    （2號標準品）    100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5
pg/ml    （1號標準品）    100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0
pg/ml    （空白對照）    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
  2.洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

·試劑盒性能：
  1.靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
  2.特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
  3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
·結(jié)果判斷與分析：
  1.儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
  2.以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的IFN-Y標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的IFN-Y含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
  3.檢測值范圍：0-400pg/ml
  4.敏感度：1.0pg/ml