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降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)失敗率技巧公布
閱讀：160 發(fā)布時間：2014-10-27| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 63.7KB |
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ELISA檢測系統(tǒng)是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段?？墒窃诓僮鬟^程中總是會出現(xiàn)或大或小的問題，比如說花板、假陽性、全顯色、信號值比空白還低等等。上海恒遠(yuǎn)今天的資料下載內(nèi)容，我們一起來看降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)失敗率技巧公布。
● 應(yīng)留意以下原理：
因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時因?yàn)樵囼?yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。詳細(xì)的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
● 在洗板時會有一定誤差，人為因素很大(當(dāng)然有前提的用洗板機(jī)除外)，洗的不*或串了孔，對如斯敏捷的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。由于聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。洗滌板：可以說在ELISA操縱中，洗滌是zui主要的樞紐技術(shù)。
● 加抗體標(biāo)本(和二抗)：注意該換槍頭時換槍頭。標(biāo)本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費(fèi)，太低則著色淺。
● 顯色：顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。
● 每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現(xiàn)問題也好分析。