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人β羥丁酸（βOHB） ELISA試劑盒說明書
閱讀：214 發(fā)布時間：2012-7-26上海恒遠生物科技有限公司專業(yè)供應(yīng)各種屬elisa試劑盒，提供免費代測服務(wù)，保證實驗結(jié)果客觀真實性。我公司對試劑盒質(zhì)量100%保證，若存在質(zhì)量問題，我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細信息，請來的咨詢：：
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
0pg/ml-160pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中β羥丁酸（βOHB）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人β羥丁酸（βOHB）水平。用純化的人β羥丁酸（βOHB）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入β羥丁酸（βOHB），再與HRP標記的β羥丁酸（βOHB）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β羥丁酸（βOHB）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人β羥丁酸（βOHB）濃度。
試劑盒組成
| 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（160pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
4. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
6. 細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
7. 培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
8. 組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.
| 80pg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 40pg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 20pg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 10pg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 5pg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
3. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
5. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
7. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
8. 溫育：操作同3。
9. 洗滌：操作同5。
10. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
11. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
12. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
4. 局限性：6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
| 人β羥丁酸（β-OHB）ELISA Kit | Human Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA Kit |
| 人極低密度脂蛋白受體（VLDLR）ELISA Kit | Human very low density lipoprotein receptor,VLDLR ELISA Kit |
| 人低密度脂蛋白受體（LDLR）ELISA Kit | Human low density lipoprotein receptor,LDLR ELISA Kit |
| 人5羥基吲哚乙酸（5-HIAA）ELISA Kit | Human 5-hydroxyindolacetic acid,5-HIAA ELISA Kit |
| 人12羥二十烷四烯酸（12-HETE）ELISA Kit | Human 20-hydroxyeicosatetraenoic acid,12-HETE ELISA Kit |
| 人流行性乙型腦炎抗體IgG（JE IgG）ELISA Kit | Human Japanese Encephalitis IgG,JE IgG ELISA Kit |
| 人羥脯氨酸（Hyp）ELISA Kit | Human hydroxyproline,Hyp ELISA Kit |
| 人EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體（EJ/GlyRS）ELISA Kit | Human anti-EJ-antibody，EJ/GlyRS ELISA Kit |
| 人葉酸（FA）ELISA Kit | Human Folic acid,FA ELISA Kit |
| 人血紅素氧合酶2（HO-2）ELISA Kit | Human heme oxygenase 2,HO-2 ELISA Kit |
| 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TFR/CD71）ELISA Kit | Human transferrin receptor,TFR ELISA Kit |
| 人γ氨基丁酸（GABA）ELISA Kit | Human Gamma-aminobutyric acid,GABA ELISA Kit |
| 人p物質(zhì)（SP）ELISA Kit | Human Substance P,SP ELISA Kit |