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豚鼠P物質(zhì)試劑盒中英文對(duì)照使用說明書下載
閱讀：628 發(fā)布時(shí)間：2012-10-23| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 63.5KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 628次 |
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豚鼠P物質(zhì)ELISA試劑盒
本試劑僅供研究使用
試劑盒內(nèi)容及其配制：
| 試劑盒成份 | 96孔配置 | 48孔配置 |
| 96/48人份酶標(biāo)板 | 1塊板（96T） | 半塊板（48T） |
| 塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品：100pg/ml | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） |
| 空白對(duì)照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） |
| 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 | 1瓶（8.0ml） | 1瓶（4.0ml） |
| 生物素標(biāo)記的抗SP抗體 | 1瓶（8.0ml） | 1瓶（4.0ml） |
| 親和鏈酶素-HRP | 1瓶（12ml） | 1瓶（5ml） |
| 洗滌緩沖液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（10ml） |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） |
| 終止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） |
1. 蒸餾水。
2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
樣品收集、處理及保存方法：
1、 血清……操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、 保存……如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分
豚鼠P物質(zhì)ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)：
● 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
● 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
● 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
● 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
● 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
● 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
● 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
安全性：
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2. 實(shí)難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
試劑的準(zhǔn)備：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
| 100 pg/ml | （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
| 50 pg/ml | （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） | 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 25 pg/ml | （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） | 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 12.5 pg/ml | （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） | 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 6.25 pg/ml | （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） | 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 3.15 pg/ml | （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） | 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 0 pg/ml | （空白對(duì)照） | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
試劑盒性能：
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
豚鼠P物質(zhì)ELISA試劑盒操作步驟：
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，
4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，
6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，
8. 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
1、 儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的SP標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的SP含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
3、 檢測(cè)值范圍： 0-100pg/ml
4、 敏感度：0.1pg/ml
Materials provided with the kit（試劑盒組成）
| 1 | wash solution | 20ml×1bottle | 7 | Stopp Solution | 6ml×1 bottle |
| 2 | HRP-Conjugate reagent | 6ml×1 bottle | 8 | Standard（1600 ng/ml） | 0.5ml×1 bottle |
| 3 | Microelisa stripplate | 12well×8strips | 9 | Standard diluent | 1.5ml×1bottle |
| 4 | Sample diluent | 6ml×1 bottle | 10 | Instruction | 1 |
| 5 | Chromogen Solution A | 6ml×1 bottle | 11 | Closure plate membrane | 2 |
| 6 | Chromogen Solution B | 6ml×1 bottle | 12 | Sealed bags | 1 |
Specimen requirements（標(biāo)本）
1. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in
2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.
Assay procedure（操作步驟）
1. Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:
| 800ng/ml | 5 Standard | 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent |
| 400ng/ml | 4 Standard | 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent |
| 200ng/ml | 3 Standard | 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent |
| 100ng/ml | 2 Standard | 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent |
| 50ng/ml | 1 Standard | 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent |
2.add sample：Set blank wells separay （blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same）. testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl （sample final dilution is 5-fold）, add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at
4.Configurate liquid: 30-fold wash solution diluted 30-fold （or 20-fold） with distilled water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.
7.incubate：Operation with 3.
8.washing：Operation with 5.
9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at
10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction（the blue color change to yellow color）.
11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.
Important notes（注意事項(xiàng)）
1. The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
2. washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
3. add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 min, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
4. if the testing material content is excessively higher （The sample OD is bigger than the first standard well ）,please dilute Sample （n-fold）, Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
6. The substrate evade the light preservation.
7. Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
8. All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
9. Do not mix reagents with those from other lots.
Storage and validity（保存條件）
1．Storage： 2
2．validity： six months.
豚鼠P物質(zhì)ELISA試劑盒原理：
SP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知SP濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將SP和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中SP的濃度呈比例關(guān)系。