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ELISA的多項環(huán)節(jié)注意（內(nèi)附示意圖）
閱讀：1430 發(fā)布時間：2014-8-21 
今日上午上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司的一位多年老客戶吳老師來電給我公司訂購白介素6試劑盒，在咨詢的過程中吳老師說：“還記得我*次實驗的時候，那時候什么都不懂，也不知道找你們的。再想想現(xiàn)在，實驗做的多了自然就熟練了，也不會那么容易出錯了。其實現(xiàn)在想想，只要在ELISA的每個環(huán)節(jié)都能細(xì)心做好，稍加注意就能做出很不多的實驗了”
· 選擇試劑
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
· 加樣
| 出錯的可能原因 |
| 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。 |
| 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時。 |
| 加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。 |
| 解決辦法 |
| 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 |
| 加樣后及時放入孵箱。 |
| 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 |
| 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 |
| 標(biāo)本較多時，請分批操作。 |
· 孵育
| 可能原因 | 解決辦法 |
| 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*。 | 貼封片或加蓋。 |
| 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。 | 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。 |
· 洗板
| 可能原因 |
| 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。 |
| 采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 |
| 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 |
| 解決辦法 |
| 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干。 |
| 合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。 |
· 顯色
· 終止
可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
· 讀板
如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
其實我們在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。