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的ELISA實(shí)驗(yàn)如何執(zhí)行操作
閱讀：935 發(fā)布時間：2014-9-16 在策劃實(shí)驗(yàn)之前首要就要了解到該實(shí)驗(yàn)的復(fù)雜性，雖說ELISA操作簡單，卻步驟多而復(fù)雜，的ELISA實(shí)驗(yàn)如何執(zhí)行操作？上海恒遠(yuǎn)教您幾招實(shí)驗(yàn)注意：
看似很無聊，其實(shí)很重要的洗滌步驟中，如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
洗板方法有手工與自動兩種，在加樣步驟中注意：吸嘴的潔凈與否和吸量的準(zhǔn)確性，直接影響檢測結(jié)果。由于吸嘴構(gòu)造特殊，導(dǎo)致清洗困難，加大了交叉污染的機(jī)會。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。
試劑盒規(guī)格有96T與48T兩種，上海恒遠(yuǎn)所提供的高質(zhì)量進(jìn)口試劑盒供實(shí)驗(yàn)室研究使用，需要在2-8℃溫度中保存，有效期為半年，也就是6個月。
1. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
2. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
3. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
ELISA包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時間，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一個晚上，37℃中保溫2小時被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。
能夠熟練的掌握好ELISA實(shí)驗(yàn)的每一步注意與技巧之后還怕結(jié)果不佳？配上上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒定能助您實(shí)驗(yàn)成功！
