詳細(xì)介紹
ELISA實(shí)驗(yàn)是一種簡(jiǎn)易操作,敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。在我們國(guó)家的科研單位、高校、醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)用的比較成熟。
一、操作要求
1.按說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。
2.ELISA試劑盒中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。
3.自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。
4.從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。
5.試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
Human factor BF ELISA KIT是*科研界較認(rèn)可的檢測(cè)方式,中文名稱(chēng):人因子(BF)ELISA試劑盒 ,試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
二、操作方法
各種類(lèi)型ELISA測(cè)定時(shí)一般需經(jīng)過(guò)這些步驟:固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。
1.重復(fù)某一樣品時(shí),加樣時(shí)間盡可能與*次接近。
2.加樣后在混勻器上充分混勻。
三、ELISA結(jié)果處理
1.ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔,然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值,復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
2.平均OD值減去空白孔的OD值。
3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
以減去本底后的OD值為X軸,標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來(lái)作圖,比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合,可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù),將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度,得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線。
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