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詳細介紹
產(chǎn)品名稱：人玻連蛋白/體外粘連蛋白
英文名稱： Human vitronectin,VNR ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
經(jīng)營種類：進口分裝和原裝
主要作用：科研
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月
運輸條件低溫運輸，用干冰或者冰袋低溫運輸。
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操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。
2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
3. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
4. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
試劑器材
1. 試劑
?。?） 包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:
NaCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml
（2） 洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4?12H2O 2.9克 NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
（3） 稀釋液:牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清與洗滌液配成5～10％使用。
?。?） 終止液（2M H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。
?。?） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:0.2M Na2HPO4（28.4克／L） 25.7ml 0.1M 檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml 加蒸餾水50ml。
?。?） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無水乙醇） 0.5ml底物緩沖液（PH5.5） 10ml0.75％H2O2 32μl
（7） ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5） 1ml 3％H2O2 2μl
?。?） 抗原、抗體和酶標記抗體。
?。?） 正常人血清和陽性對照血清。
2. 器材:
?。?） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。
?。?） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
?。?） 4℃冰箱，37℃孵育箱。
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