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        1. 上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

          腮腺組織消化手冊(cè)

          時(shí)間:2016-2-16閱讀:695

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          Worthington組織消化指南

          引言

          組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年,但是對(duì)其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒有全面的理解。  由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過去的經(jīng)驗(yàn),而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案,以及如何根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

          細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個(gè)細(xì)胞,而影響結(jié)果的原因有很多,包括(不限于)以下:

          1、組織類型

          2、物種來源

          3、動(dòng)物年齡

          4、遺傳改造情況(如knockouts

          5、所用的消化培養(yǎng)液

          6、所用的酶

          7、消化酶中的雜質(zhì)

          8、所用消化酶的工作濃度

          9、溫度

          10、孵育時(shí)間

          通常前四個(gè)原因沒辦法選擇,而剩下的原因一般由經(jīng)驗(yàn)決定以獲取zui適實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

          通過查閱文獻(xiàn)來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的特性,以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外,組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成,這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育(年齡)之間存在明顯的差異,這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶,如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

          本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識(shí)和方法,描述了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)步驟, 便于制定一個(gè)*的細(xì)胞分離方案,同時(shí)列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。

          下表列出多種組織的適宜消化酶(含參考文獻(xiàn),以組織類型和物種分類,詳見鏈接)

          脂肪組織

          腎上腺組織

          骨組織

          腦組織

          軟骨組織

          結(jié)腸組織

          內(nèi)皮組織

          上皮組織

          心臟

          淋巴結(jié)

          乳腺

          其它組織

          其他組織

          肌組織

          神經(jīng)組織

          胰腺

          腮腺

          垂體

          前列腺

          生殖

          動(dòng)物鱗片

          皮膚

          脾臟

          干細(xì)胞

          胸腺

          甲狀腺/甲狀旁腺

          扁桃體

          腫瘤

           

           

           

          注:使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列,一般而言,Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

           

          腮腺組織消化手冊(cè)

           

          物種詳細(xì)來源細(xì)胞名稱消化用酶培養(yǎng)基參考文獻(xiàn)
          小鼠小鼠Parotid and sublingual glandularNeutral Protease: 50 u/mlPBSOgawa, M., Oshima, M., Imamura, A., Sekine, Y., Ishida, K., Yamashita, K., Nakajima, K., Hirayama, M., Tachikawa, T. and Tsuji, T.: Functional Salivary Gland Regeneration by Transplantation of a Bioengineered Organ Germ., Nat Commun 4, 2498, 2013
          Collagenase Type 1: 100 u/ml
          大鼠Wistar大鼠, 雄性, 130 克AcinarCollagenase: 75 u/mlRPMI 1640Looms, D., Dissing, S., Tritsaris, K., Pedersen, A. and Nauntofte, B.: Adrenoceptor-Activated Nitric Oxide Synthesis in Salivary Acinar Cells., Adv Dent Res 14, 62, 2000
          Hyaluronidase: 153 u/ml
          大鼠SD大鼠,  100-120 克Parotid acinar cellsCollagenase Type 2: 90 u/mlKrebs-Henseleit BicarbonateD'Silva NJ, DiJulio DH, Belton CM, Jacobson KL, Watson EL: Immunolocalization of Rap1 in the rat parotid gland: detection on secretory granule membranes, J Histochem Cytochem 45, 965-73, 1997
          大鼠SD大鼠, 雄性EpithelialCollagenase: 50-75 u/mlHBSS CFPrasad, K.N., Edwards-Prasad, J., Carvaiho, I., LaRosa, F.G., Baibinder, E., Meyers, A., and Quissell, D.: Establishment of Primary Cultures of Rat and Human Parotid Epithelial Cells for Transfection Experiments, In Vitro Cell Dev Biol 28, 493, 1992
          Hyaluronidase: 0.1%
          大鼠SD大鼠, 雄性, 100-150 克Parotid acinarTrypsin: 0.001%F12 mediumYeh, C., Mertz, P., Oliver, C., Baum, B., and Kousvelari, E.: Cellular Characteristics of Long-Term Cultured Rat Parotid Acinar Cells, In Vitro Cell Dev Biol 27, 707, 1991
          大鼠Wistar大鼠,  雄性Parotid acinarTrypsin: 0.02%Solution BFoskett, J., Roifman, C. and Wong, D.: Activation of Calcium Oscillations by Thapsigargin in Parotid Acinar Cells, J Biol Chem 266, 2778, 1991
          (See reference)
          大鼠大鼠ParotidHyaluronidase: 0.025%HBSS with 20mM HEPESTakuma, T. and Ichida, T.: Amylase Secretion From Saponin-Permeabilized Parotid Cells Evoked by Cyclic AMP, J Invest Dermatol 103, 95, 1988
          大鼠Wistar大鼠, 雄性, 250 - 350 克Acinar, parotidHyaluronidase: 0.015%Earle's MEMMelvin, J., Kawaguchi, M., Baum, B., and Turner, R.: A Muscarinic Agonist-Stimulated Chloride Efflux Pathway is Associated With Fluid Secretion in Rat Parotid Acinar Cells, Biochem Biophys Res Commun 145, 754, 1987
          大鼠SD大鼠, 雄性, 50 - 125 克AcinarTrypsin: 0.01%HBSS, CMFOliver, C., Waters, J., Tolbert, C., and Kleinman, H.: Growth of Exocrine Acinar Cells on a Reconstituted Basement Membrane Gel, In Vitro Cell Dev Biol 23, 465, 1987
          Exorbital lacrimal, parotid, pancreas
          大鼠SD大鼠, 白化變種, 雄性, 150-200 克Acinar, parotidTrypsin: 0.01%HBSS CMFMangos, J., McSherry, N., Butcher, F., Irwin, K., and Barber, T.: Dispersed Rat Parotid Acinar Cells (Morphological, Functional Character), Am J Physiol 229 (3), 560, 1975
          Collagenase: 40-50 u/ml
          Hyaluronidase: 0.10%

           

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