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如何利用超微量分光光度計(jì)判斷RNA質(zhì)量？
閱讀：958 發(fā)布時(shí)間：2022-9-20
在RNA的提取過(guò)程中，外源物質(zhì)的引入、操作不規(guī)范、內(nèi)外源性核酸酶的影響，都會(huì)導(dǎo)致RNA的降解，影響提取質(zhì)量。利用核酸電泳可以判斷RNA的完整性，通過(guò)分光光度計(jì)可以驗(yàn)證RNA的濃度和純度。
在超微量分光光度計(jì)上，加入1-2微升的RNA提取樣本就可以進(jìn)行光吸收的檢測(cè)。從結(jié)果中我們可以得到RNA的光譜圖、濃度、a260/280的比值、a260/230的比值。
不同物質(zhì)有不同的吸收波長(zhǎng)：
A260nm是核酸吸收峰的吸收波長(zhǎng)；A230nm是碳水化合物和鹽等的吸收波長(zhǎng)；A280nm是蛋白和酚類(lèi)物質(zhì)吸收峰的吸收波長(zhǎng)。
由于樣品差異，我們提取的RNA濃度不一，需要根據(jù)目的基因表達(dá)水平及預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定最合適的RNA濃度。
除了濃度之外，我們還會(huì)得到A260/280和A260/230兩個(gè)比值，這兩個(gè)參數(shù)是核酸純度的指示值。
純凈的RNA樣品A260比A280接近2.0。如果比值低于1.8，表示存在蛋白或酚類(lèi)物質(zhì)的影響；如果比值大于2.2，表明RNA已經(jīng)發(fā)生了降解。所以比值范圍在1.8-2.2這個(gè)范圍內(nèi)，結(jié)果都是合格的。
純凈的RNA樣本的A260和A230的比值大于2.0，若比值小于2.0，則表明樣品被碳水化合物（糖類(lèi)）、鹽類(lèi)或有機(jī)溶劑污染，需要純化樣品。
所以，評(píng)判RNA的質(zhì)量，一定要用超微量分光光度計(jì)對(duì)RNA濃度和純度的進(jìn)行驗(yàn)證哦。只有這些參數(shù)都在可用范圍之內(nèi)，提取到的RNA才是可用的。