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人ELISA試劑盒常見(jiàn)液體標(biāo)本的處理方法
閱讀：122 發(fā)布時(shí)間：2018-4-4| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.9KB |
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人ELISA試劑盒常見(jiàn)液體標(biāo)本的處理方法：
液體類(lèi)標(biāo)本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
①血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
②尿液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
③組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
標(biāo)本處理注意事項(xiàng)：
（1）.均質(zhì)：
①組織樣本：肉、肝食品類(lèi)切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。
②水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。
③蛋類(lèi)：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。
④水果、蔬菜類(lèi)：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。
（2）.振蕩提?。?br />將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測(cè)組分。
①振蕩方式：振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
②在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí)，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團(tuán)，不利于提取。
（3）.乳化現(xiàn)象：
在用有機(jī)溶劑提取過(guò)程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：
①用細(xì)頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。
②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
（4）.濃縮：
由于凈化過(guò)程中引入的溶劑，可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈桑儆脧?fù)溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式：氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。
請(qǐng)注意：
①在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。
②在吹樣本時(shí)，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。
③樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響zui終檢測(cè)結(jié)果。
④不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
（5）.凈化：
經(jīng)過(guò)提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過(guò)程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見(jiàn)的凈化是：液液分配法。
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