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大鼠ELISA試劑盒檢測(cè)樣本處理方法
閱讀：157 發(fā)布時(shí)間：2018-4-8| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 22.8KB |
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大鼠ELISA試劑盒檢測(cè)樣本處理方法
1、血清
血清是zui常用于elisa檢測(cè)的一類樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。同時(shí)必須得注意，在采血的過程中應(yīng)避免溶血，以及避免細(xì)菌污染，以免造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確。
2、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
3、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min，取上清即可檢測(cè)。為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
4、細(xì)胞裂解液
1.吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
2.收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的pbs潤(rùn)洗3次。
3.加入適量的預(yù)冷pbs或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μl pbs重懸。
4.將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。
5.4℃ 10000×g 離心10min，除去細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
5、細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
6、組織勻漿液
1.將組織樣本用pbs (0.01m, ph 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2.將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分
3.將組織按一定的比例加入預(yù)冷的pbs（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿比例為組織重量：pbs體積=1:9，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。
4.吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
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