試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義 植物細(xì)胞壁中的果膠是植物初生細(xì)胞壁的主要成分,除了起結(jié)構(gòu)支撐、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)茸饔猛?,還具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細(xì)胞壁的堅(jiān)韌程度及其抗性。 測(cè)定原理 果膠甲酯鍵經(jīng)皂化處理后釋放出甲醇,甲醇與2,4-戊二酮反應(yīng)顯色,在412nm下測(cè)定吸光值;同時(shí)半乳糖醛酸在70℃下與濃硫酸反應(yīng)生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸,5-甲酰基-2-呋喃甲酸與3,5-二甲基ben酚反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì),在450nm下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
炭黑曲霉9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框174抗體Human HPX(Hemopexin) ELISA Kit人黑色瘤免疫試劑盒
大腸埃希氏菌6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64抗體Human TLR5(Toll-like receptor 5) ELISA Kit人黑色免疫試劑盒
類芽孢桿菌屬免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) ELISA Kit人核因子κB抑制物激β(IKK-β)免疫試劑盒
亞細(xì)亞菌屬透明質(zhì)介導(dǎo)游走受體抗體Human ARRB2(Beta-arrestin-2) ELISA Kit人核因子κB抑制物激α(IKK-α)免疫試劑盒
東方伊薩酵母周期樣Y1抗體Human CNN1(Calponin-1) ELISA Kit人核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒
根瘤菌周期J抗體Human ProHAMP(Hepcidin prohormone) ELISA Kit人核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 免疫試劑盒
青紫鏈霉菌周期L抗體Human MMP28(Matrix metalloproteinase-28) ELISA Kit人核心蛋白聚糖(DCN)免疫試劑盒
北方蜜環(huán)菌補(bǔ)體C1RL鏈多肽抗體Human CBS(Cystathionine beta-synthase) ELISA Kit人核糖體合成蛋白NSA2同源物(NSA2)免疫試劑盒
釀酒酵母周期M2抗體Human ADAMTS7(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 7) ELISA Kit人核糖體蛋白S9(RPS9)免疫試劑盒
鏈霉菌周期T2抗體Human EDA(Ectodysplasin-A) ELISA Kit人核糖體蛋白S25(RPS25)免疫試劑盒
白地霉周期K抗體Human TNC(Tenascin) ELISA Kit人核糖核抑止劑(RNH1/PRI/RNH)免疫試劑盒
天藍(lán)褐鏈霉菌抗菌肽CAMP抗體Human IL36A(Interleukin-36 alpha) ELISA Kit人核糖核,核糖核A家族,(肝臟,嗜性粒源性神經(jīng))(RNASE2)免疫試劑盒
釀酒酵母5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框4抗體Human HPX(Hemopexin) ELISA Kit人核糖核(RNASE1/RIB1/RNS1)免疫試劑盒
大腸埃希菌4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框44抗體Human MAPT(Microtubule-associated protein tau) ELISA Kit人核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)免疫試劑盒
膠孢4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框33抗體Human TLR5(Toll-like receptor 5) ELISA Kit人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)免疫試劑盒
pET-23a4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) ELISA Kit人核黃激(RFK)免疫試劑盒
Microsphaeropsis arundinisMicrosphaeropsis│arundinis 質(zhì)量規(guī)格:IND紫蘇烯
缺陷短波單胞菌Brevundimonas│diminuta 質(zhì)量規(guī)格:AR;IND苦蒿
立枯絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質(zhì)量規(guī)格:0.9西瑞香
果膠甲酯化程度測(cè)試盒100管/96樣洲哈茨木霉 4-氟葡萄糖氧化Elisa
奇異變形 2-氟-4-羥基苯甲敏感性脂肪Elisa
鹽城海桿 二(2,6,10-十二碳三烯-1,12-二基)釕(IV)脂蛋白酯Elisa
半軟干酪居真細(xì) 1,5-環(huán)辛二烯(六氟乙酰酮)(I)銥肝脂Elisa
大腸埃希氏桿 4-氟苯基苯乙酮強(qiáng)啡肽Elisa
灰黃青霉 5-溴異喹啉血管緊張轉(zhuǎn)換抑制劑Elisa
枯草芽孢桿 甲基烯酸二環(huán)戊基酯脂肪酸β氧化Elisa
雞油 2-三氟甲基喹啉二酰基甘油?;D(zhuǎn)移Elisa
冠突曲霉 1-[3-(trifluoromethoxy)phenyl]ethanol硫酸角質(zhì)Elisa
環(huán)狀芽孢桿 5-羥基-1-茚酮鳥核苷酸交換因子4Elisa
葡萄座腔 (R)-(-)-3-甲基-2-丁鳥核苷酸交換因子4Elisa
多粘類芽孢桿 2,2′-聯(lián)嘧啶肥大β類胰蛋白Elisa
蘇云金芽孢桿 4-溴苯甲砜Rhodes激Elisa
枯草芽孢桿 2-(4-溴苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶線粒體呼吸鏈復(fù)合物IVElisa
果生鏈核盤 2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲線粒體呼吸鏈復(fù)合物VElisa