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公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
核酮糖1,5-二磷酸羧化酶提取試劑 | 500ml | FS-R6556 |
產(chǎn)品分類:細胞組分分離
儲存條件:4℃,6個月
用途:主要用于裂解植物組織,提取樣品中的核酮糖1,5-二磷酸羧化酶
注意事項:一種酶(EC 4.1.1.39),分子量約為53kD,由8個大亞基和8個小亞基組成,是光合作用中決定碳同化速率的關鍵酶,該酶活力的大小反應了植物光合能力的強弱,RUBP羧化酶是光合作用碳代謝中的重要的調(diào)節(jié)酶,主要存在于葉綠體的可溶部分,總量占葉綠體可溶蛋白50-60%。在植物葉片發(fā)育過程中,此酶活性呈規(guī)律性的變化,在植物衰老或遭受環(huán)境脅迫時,酶活性呈下降趨勢。
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
他環(huán),烯土霉(標準品) Amlodipine角蛋白13抗體包裝25g
托宗(標準品) Amlodipine白免疫球蛋白樣受體-B抗體包裝500g
雄諾龍(標準品) NizatidineCD33L抗體包裝100g
門冬胰島(標準品) Carboxymethyl cellulose 角蛋白10抗體包裝25g
(標準品) Fludarabine軸突生長因子CD108抗體包裝5g
(標準品) Fludarabine唾液結合性免疫球蛋白樣凝集5抗體包裝1g
咪喹莫特(標準品) G-418 disulfate,GeneticinCD329抗體包裝1g
咪唑(標準品) Erlotinib嗜粒趨化蛋白14抗體包裝1g
咪唑煙(標準品) N-Acetyl-cysteine1號染色體開放閱讀框57抗體包裝250mg
米(標準品) Zopiclone2號染色體開放閱讀框18抗體包裝100ml
米奈鈣(標準品) Zopiclone色c氧化6抗體包裝100g
(標準品) Aniracetam嗜粒趨化蛋白24抗體包裝25g
米諾地爾(硫鹽)敏樂啶(標準品) Aniracetam巨噬炎性蛋白15包裝100ml
米屈肼(標準品) L-Glutamine巨噬炎性蛋白抗體包裝500ml
米替福新(標準品) RoflumilastCD72蛋白抗體包裝1g
擬青霉屬Paecilomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>720IU/MG,BR膜DNA抗體試劑盒1-脫氧野尻霉;1-Deoxynoji
醋化醋桿菌Acetobacter│aceti 質(zhì)量規(guī)格:效價測定角蛋白21-1片段試劑盒;Tacrolimus
肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格:EP/USP角蛋白18-M65試劑盒10-脫乙?;投II;10-Dea
核酮糖1,5-二磷酸羧化酶提取試劑PDK1(phospho Y373 + Y376) /FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠化3肌依賴性蛋白激1IgG2-酰吡啶 Standard for GC ,≥99.5% (GC)
Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC 熒光標記化3肌依賴性蛋白激1IgG1-己硫 96%
Pdk4/FITC 熒光標記酮脫氫激4IgG2,3-戊二酮 98%
Pdx1/FITC 熒光標記胰十二指腸同源異型盒因IgG2,4-二羥苯酮 99%
PEA3/FITC 熒光標記多瘤促活化因子IgG2,6-二羥苯酮 99%
PEA15/FITC 熒光標記星形膠質(zhì)PEA15IgG三(3,6-二氧雜庚) 95%
Phospho-PEA15 (Ser4)/FITC 熒光標記化星形膠質(zhì)PEA15IgG AR
Phospho-PEA15 (Ser116) /FITC 熒光標記化星形膠質(zhì)PEA15IgG 99.99% metals basis
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。