商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶,測(cè)定SBE活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。測(cè)定原理淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收,SBE可切斷支鏈淀粉側(cè)支,從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值,一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。需自備的的儀器和用品可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
Prosapogenin CP6英文名: MagnesonII白介16抗體包裝1g
Raddeanoside 20英文名: Ferron抑制βB/Inhibin β B抗體包裝250mg
Sapindoside A英文名: 3-Methyl-2-benzothialinone白介11抗體包裝1g
Smyrindioloside英文名: Miglitol白介22受體抗體包裝5g
Thonningianin A英文名: Miglitol白介26抗體包裝1g
Tokinolide B英文名: 1-Naphtholphthalein白介-17D抗體包裝25g
Triptonine B英文名: Dapoxetine hydrochloride環(huán)指蛋白217抗體包裝5g
α-倒捻子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Dapoxetine hydrochloride白介2抗體(人)包裝1g
α-蒎烯英文名: Fast Black K Salt白介-23受體抗體包裝500mg
α-乳香英文名: Amido black 10B胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3抗體包裝5g
α-石竹烯英文名: Naltrexone hydrochloride白介6受體β抗體IL-6Rβ包裝1g
α-細(xì)辛腦,細(xì)辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Triphenylarsine oxide干擾-gamma受體1抗體包裝25g
α-香附(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 5,7,4’-Trihydroxy-8-methylflavanone白介1α前肽/IL-1α前肽抗體包裝5g
α-常春藤皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Aloin B整合α11抗體包裝1g
β,β-二基烯酰阿寧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Arctigenin 4'-O-β-gentiobioside胰島生長(zhǎng)因子樣家族成員2抗體包裝5g
弗氏志賀菌Shigella│flexneri 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR什曼原蟲(chóng)試劑盒L-精;L(+)-Arginine
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR,可用于培養(yǎng)尿肽試劑盒積雪草;Asiatic acid
弧菌Vibrio│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP,BR李斯特菌抗體試劑盒金雀花堿;Cytisine
淀粉分支酶(SBE)測(cè)試盒50管/24樣冷溫木克酵母 3-溴苯甲二乙縮琥珀酸脫氫Elisa
泗川假黃單胞 2-溴-5-甲氧基苯甲α-淀粉Elisa
枯草芽孢桿 3--2-甲酸磷酸化組蛋白Elisa
堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 三氟甲磺鎵豆酸Elisa
植物乳桿 苯氧乙酸烯酯Elisa
炭球 硫酸銣生長(zhǎng)Elisa
固氮假單胞 亞硫酸鋅蔗糖合成Elisa
釀酒酵母 BOC-L-羥脯甲酯神經(jīng)酰-1-磷酸Elisa
地衣芽孢桿 2-羥基-2-酮鞘糖脂Elisa
糞產(chǎn)堿桿 氨基三甘單甲脂肪酸去飽和Elisa
大腸埃希氏(大腸桿)* 4-溴-3,5-二N-乙酰葡糖Elisa
芽胞桿 4-氨基-2-嘧啶磷酸核酮糖激Elisa
格氏糖多孢 二乙二雙(對(duì)甲苯磺酸酯)神經(jīng)酰Elisa
白僵 α,ω-雙{2-[(3-羧基-1-氧基)氨基]乙基}聚乙二神經(jīng)鞘氨Elisa
枯草芽孢桿 α,ω-雙{2-[(3-羧基-1-氧基)氨基]乙基}聚乙二1磷酸鞘氨Elisa