試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究S-NR的活性對(duì)合理施肥,降低氮素的損失具有重要意義。測(cè)定原理S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對(duì)–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法測(cè)定。需自備的儀器和用品可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
(+/-)-前列鈉鹽合物英文名: ullerene Extract, C60 (contains ca. 20% C70)CASP抗體包裝25g
(-)-反式-4-[4-(4'-基)-3-哌啶...英文名: Fullerene C60絲/蘇激蛋白PIM1+PIM3抗體包裝500g
(1R,4R)-N-去基鹽舍曲林英文名: Fullerene C70胞漿蛋白PACSIN3抗體包裝1G
(1R,4S)-N-去基鹽舍曲林英文名: C60MC12跨膜接頭蛋白PAG抗體包裝1g
(1RS)-1-(6-氧-2-萘基)乙(萘普生雜質(zhì)...英文名: Carbon Nanotube Single-walled (>55%) below 2nm(diam.), 5-15µm(length)PARD6G蛋白抗體包裝25g
(1S,4R)-N-去基鹽舍曲林英文名: Carbon Nanotube Double-walled (>50%) below 5nm(diam.), 5-15µm(length)胎盤蛋白6抗體包裝5g
(1S,4R)鹽舍曲林英文名: Carbon Nanotube Herringbone 10-20nm(diam.), 5-15µm(length)磷肌3激接頭蛋白1抗體包裝1g
(1S,4S)-N-去基鹽舍曲林英文名: Carbon Nanotube Bundled Multi-walled below 10nm(diam.), 5-15µm(length) (allowable temperature limit : 620°C)PRAM1蛋白抗體包裝250mg
(2S,3R,4E)-2-疊氮-3-(叔丁基二基硅烷...英文名: Carbon Nanotube Multi-walled below 10nm(diam.), 5-15µm(length)廣譜角蛋白PCK抗體包裝5g
(2S,3R,4E)-2-疊氮-3-(叔丁基二基硅烷...英文名: Carbon Nanotube Multi-walled below 10nm(diam.), 1-2µm(length)Rho鳥甘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體包裝1g
(2S,3R,5S)-5-[(N-酰-L-亮酰)氧...英文名: Carbon Nanotube Multi-walled 10-20nm(diam.), 5-15µm(length)磷化磷脂酰肌激抗體包裝250mg
(2α,2β)-17-(Acetyloxy)-2,6-...英文名: Carbon Nanotube Aligned Multi-walled 10-20nm(diam.), 5-15µm(length)磷化帕金蛋白抗體包裝25g
(3R,5R)-羅舒伐他英文名: Carbon Nanotube Multi-walled 10-30nm(diam.), 5-15µm(length)磷化帕金蛋白抗體包裝5g
(3R,5S)-伐他鈉鹽英文名: Carbon Nanotube Multi-walled 10-30nm(diam.), 1-2µm(length)磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體B抗體包裝5g
(3R,5S)伐他鈉鹽英文名: Carbon Nanotube Multi-walled 20-40nm(diam.), 5-15µm(length)磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體B抗體包裝5mg
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:羅氏原裝,濃度50mg/ml瓜1;4-醌(對(duì)醌);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;
假交替單胞菌Pseudoalteromonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品骨織試劑盒維生E;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品(α-);
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品骨形成蛋白6試劑盒雙;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
土壤硝酸還原酶(SNR)測(cè)試盒50管/24樣褐孢大禿馬勃 3-氨基-2,6-二氟甲酯分泌型球蛋白EElisa
微小桿 3--4-三氟甲基芐草酰乙酸Elisa
香菇 N-羥基叔丁酯β-防御2Elisa
鏈霉 6-甲酸甲酯生物Elisa
矮小傘枝霉 3--2-羧酸甲酯球蛋白EFc段受體IElisa
大腸埃希 1,4-苯二乙酸二乙酯甘油三脂Elisa
單梗頭孢霉屬 甲基谷胎球蛋白BElisa
毛尖蘑 cortienic acid乙腦特異性抗體Elisa
Virgibacillus 3-基-4-孔肯尼亞病抗體Elisa
綠色木霉 7--1H-吡咯并[3,2-b]吡啶蛋白激AElisa
枯草芽孢桿 水楊基熒光酮諾如病Elisa
簡(jiǎn)單青霉 4--6,7-二甲氧基喹啉胱硫分解Elisa
釀酒酵母 八氟戊GRO;KCElisa
釀酒酵母 全氟己烷β-羥丁酸Elisa
枯草芽孢桿 五氟血管緊張Ⅱ受體1Elisa