商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義 硝酸還原酶(NiR)是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),是自然界氮循環(huán)過(guò)程中的關(guān)鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對(duì)生物體的毒害作用。 測(cè)定原理 亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO,使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2—減少,即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)亞硝酸還原酶的活性。 需自備的儀器和用品 天平、研缽、可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
17b-hydroxyandrost-4-ene-3-...英文名: OxaliplatinCD163蛋白樣1抗體包裝1mg
17α-Methyltestosterone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Oxiconazole Nitrate周期依賴性激5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1抗體包裝1g
1,3-(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Oxytetracycline HCl22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框31抗體包裝250mg
1,6-二氫-2-基-6-氧代-(3,4’-二吡啶)...英文名: Oxytetracycline HCl分裂周期37樣蛋白1抗體包裝1g
2,3,4-三氧基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Oxytocin Acetate羧肽X(M14家族1)抗體包裝250mg
2,3,4-三氧基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Paclitaxel卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白135抗體包裝100g
2,3,4-三氧基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Paclitaxel跨膜結(jié)構(gòu)域邊緣蛋白CEE抗體包裝25g
2,3-丁二(標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))英文名: Palonosetron HCl分子伴侶CESK1蛋白抗體包裝500g
2,3-二氫-6-基咪唑【2,1-b】噻唑鹽鹽(鹽...英文名: Paromomycin Sulfate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體包裝5g
2,6-二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Paromomycin SulfateCDK5激活結(jié)合蛋白1抗體包裝100g
2,6-二基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pazufloxacin Mesilate磷化表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體包裝25g
2-(4-異丁?;?biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pazufloxacin Mesilate腫瘤/抗原1B/1A包裝25g
2-基-4-(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pefloxacin mesylate dihydrate磷化分裂周期蛋白25B抗體包裝5g
2-乙酰(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pefloxacin mesylate dihydrate跨膜蛋白12抗體包裝1g
2-單硝異山梨酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pemetrexed Disodium免疫球蛋白超家族成員16抗體包裝250mg
紅曲霉(斜面)Monascus anka 質(zhì)量規(guī)格:>95%血小板相關(guān)免疫球蛋白試劑盒亞麻木;Secoisolaricir
白鮑魚(yú)菇Pleurotus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥595 µg/mg,BR血小板相關(guān)抗體IgM試劑盒氧化苦參堿;Ammothamnine
亮葉耳環(huán)根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定血小板生成自身抗體試劑盒野黃芩苷;Scularin
亞硝酸還原酶(NiR)測(cè)試盒50管/24樣扭曲毛殼 2-氨基-3-甲酸甲酯同型半胱酸Elisa
*蛹蟲(chóng)草 (R)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙3-羧基-4-甲基-5-基-2酸Elisa
米曲霉 N,N-二(4-基)苯ESRI 抗體Elisa
釀酒酵母 3,5-二叔丁基苯致癌物質(zhì)Elisa
釀酒酵母 還原桃紅R致癌物質(zhì)Elisa
泡盛曲霉 2--5-甲基噻吩蛋白磷酸脂Elisa
赭黃裸傘 3-氧代環(huán)丁烷基羧酸天門(mén)冬酰Elisa
沙漠奇異球 三乙酰基-β-環(huán)糊精血管緊張轉(zhuǎn)化抑制劑Elisa
大腸埃希 3,4-(亞甲二氧)肉桂酸階段特異性胚胎表面抗原4Elisa
乳桿屬 1,2-二溴-4-氟苯表皮生長(zhǎng)因子受體-T790MElisa
枯草芽孢桿 6-吡-2-羧酸血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165Elisa
旋柄腐霉 2-氟苯肼V LeidenElisa
枯草芽孢桿 8-氨基異喹啉凝血原20210AElisa
巴氏醋桿 6-氨基異喹啉弓蛔蟲(chóng)Elisa
熱帶頭梗霉 屈西多巴神經(jīng)調(diào)節(jié)-1Elisa