詳細介紹
產(chǎn)品分類:核酸雜交
儲存條件:室溫,24個月
用途:雜交緩沖液
注意事項:其終濃度為:氯化鈉3M,磷酸二氫鈉0.2M、EDTA0.02M。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
SSPE緩沖粉劑 | 1L | FS-R7395 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
短密青霉肌球蛋白輕鏈激抗體Human PICP(C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(I) chain) ELISA Kit磷化乙酰(PaCoA)
大腸埃希氏桿菌MYCBPAP抗體Human IMPA2(Inositol monophosphatase 2) ELISA Kit磷化腺苷活化蛋白激(pAMPK)
香菇組織相容性復合體蛋白1抗體Human CARTPT(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript protein) ELISA Kit磷化腺苷活化蛋白激(AMPK)
擴散炭層菌線粒體核糖體蛋白S22抗體Human COL1A1(Collagen Type I Alpha 1) ELISA Kit磷化外信號調(diào)節(jié)激(pERK)
毛栓孔菌棕櫚?;さ鞍?/span>7抗體Human PTTG2(Securin-2) ELISA Kit磷化糖原合激3β(pGSK3B)
泡囊短波單胞菌小鼠抗單克抗體Human COL2A1(Collagen alpha-1(II) chain) ELISA Kit磷化糖原合成激3(pGSK-3)
乳乳球菌乳亞種肌球蛋白輕鏈1/3抗體Human PTTG1IP(Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein) ELISA Kit磷化肌球蛋白輕鏈(PMLC)
葡萄座腔菌屬磷化肌球蛋白輕鏈抗體Human NUSAP1(Nucleolar and spindle-associated protein 1) ELISA Kit磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)
大腸埃希菌肌肉特異性泛蛋白連接1抗體Human OxLDL(Oxidized low-density lipoprotein) ELISA Kit磷化蛋白激C(P-PKC)
產(chǎn)氣列契瓦爾氏菌泛蛋白連接抗體Human PIIINP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(III) chain) ELISA Kit磷化蛋白激B(P-PKB)
大腸埃希菌單羧轉(zhuǎn)運蛋白2抗體Human MYOCD(Myocardin) ELISA Kit磷化cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(pCREB1)
芬青霉可溶性蘋果脫氫抗體Human NRN1(Neuritin) ELISA Kit磷甘油變位2(PGAM2)
云芝栓孔菌(變色栓菌)蛋白激C亞性D型抗體Human MITF(Microphthalmia-associated transcription factor) ELISA Kit淋巴趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)
枝孢屬磷化µ-型受體抗體Human LMAN2(Vesicular integral-membrane protein VIP36) ELISA Kit淋巴抗原6復合物基因座A(Ly6a)
鏈霉菌磷化絲裂原活化蛋白激激1/2抗體Human MDH2(Malate dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)
釀酒酵母基質(zhì)金屬蛋白9抗體Human MMP17(Matrix metalloproteinase-17) ELISA Kit淋巴功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)
澳型核果褐腐病菌Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鹽甜菜堿
淡紫擬青霉(新引種)Paecilomyces lilacinus 質(zhì)量規(guī)格:粘度100000mPa.s甜菜堿
: SK1023/61資源名稱: 坎德沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:4000mPa.s,BR鼠李糖
SSPE緩沖粉劑Cyclin-D3(Mouse Cyclin-D3) ELISA Kit 小鼠細胞周期suD3規(guī)格: 48T
Cyclin-D2(Mouse Cyclin-D2) ELISA Kit 小鼠細胞周期suD2規(guī)格: 48T
E(Mouse estrogen) ELISA Kit 小鼠雌激su規(guī)格: 48T
Cyclin-D1(Mouse Cyclin-D1) ELISA Kit 小鼠細胞周期suD1規(guī)格: 48T
MBP(Mouse myelin basic protein) ELISA Kit 小鼠髓磷脂性蛋白規(guī)格: 48T