詳細介紹
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PEG1000溶液 | 10ml | FS-R6387 |
產(chǎn)品分類:細胞培養(yǎng)
儲存條件 4℃,6個月
用途 聚乙二醇誘導細胞融合,可用作融合劑,以獲得單克隆抗體的雜交瘤細胞,誘導細胞雜交
注意事項 無菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG1000或稱聚乙二醇1000組成,經(jīng)無菌處理。體外培養(yǎng)的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可以做融合,但成功概率較大的是單層貼壁細胞。
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
opiorphin(opiorphin)opiorphin ELISA KitBTBD6蛋白抗體包裝5g
N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯(AcSDKP)AcSDKP ELISA KitBMP內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25g
N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)NAG ELISA Kit肝病NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體包裝5g
N端前腦鈉(NT-proBNP)NT-proBNP ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體包裝1g
NANOG同源域蛋白(NANOG)NANOG ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體包裝5g
NAD依賴性蛋白脫乙酰sirtuin-1(SIRT1)SIRT1 ELISA Kit微管蛋白β輔助因子D抗體包裝25g
NADPH氧化1(NOX1)NOX1 ELISA Kit鈣粘蛋白相關蛋白受體BTR1抗體包裝5g
M型肌激(CKM)CKM ELISA Kit有絲分裂蛋白BUB3抗體包裝1g
MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)MAPKAPK2 ELISA Kitp60TRP蛋白抗體包裝5g
L選擇(L-Selectin/CD62L)L-Selectin/CD62L ELISA Kit博萊霉解抗體包裝1g
L-乳脫氫A鏈(LDH-A)LDH-A ELISA Kit短蛋白聚糖抗體包裝5g
L解(PAL)PAL ELISA KitBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝10MG
Klotho(Klotho)Klotho ELISA Kit巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白12抗體包裝100g
KI-67抗原(MKI67)MKI67 ELISA Kit堿性亮鏈蛋白BZW1抗體包裝25g
I型膠原蛋白(COL-1)COL-1 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體包裝5g
ASH1蛋白抗體肝核因子1β(HNF1β)CWHM-12是αV整聯(lián)蛋白的有效抑制劑,抑制αvβ8,αvβ3,αvβ6和αvβ1的 IC50 值分別為0.2,0.8,1.5,1.8 nM。
PEG1000溶液EAAT2/FITC 熒光標記抗膠質(zhì)谷氨運載蛋白2IgG三 GR,99.5%
EAAT3/FITC 熒光標記抗膠質(zhì)谷氨運載蛋白3IgG三 用于氨分析, ≥99.5% (GC)
EAG1/FITC 熒光標記離子通道蛋白EAG1IgG三 LC-MS淋洗劑, ≥99.5% (GC)
EBNA-3/FITC 熒光標記EB病核抗原-3IgG(R)-(-)-3--1,2- 97%
E-cadherin/FITC 熒光標記E-鈣粘附分子IgG(S)-(+)-3--1,2- 97%
ECE1/FITC 熒光標記內(nèi)皮轉(zhuǎn)化1IgG(±)-環(huán)氧 96%
ECE2/FITC 熒光標記抗內(nèi)皮轉(zhuǎn)化2IgG氨比林 CP
ECG2/FITC 熒光標記食道癌相關因IgG土霉 97%
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。