公司產(chǎn)品僅供科研使用:
商品介紹:
商品介紹 測(cè)定意義 乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸,在酒精代謝中起主要作用。在人類(lèi)和許多動(dòng)物體內(nèi),線粒體乙醛脫氫酶能把對(duì)生物體有害的醇類(lèi)轉(zhuǎn)化,所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注;同時(shí),乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測(cè)方面有較廣泛的研究應(yīng)用。 測(cè)定原理 在輔酶Ⅰ存在的條件下,乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,在340nm處的吸光值會(huì)增加,測(cè)定340nm處的吸光值變化,可計(jì)算得到乙醛脫氫酶的活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、蒸餾水。 |
常見(jiàn)樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液) ,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:雙試劑,直接操作,快速、簡(jiǎn)便。
2、取樣量微:需要的樣本量是羥胺法的1/10。
3、靈敏度高:檢測(cè)線0.5U/ml,是羥胺法5倍,鄰苯三酚法的200倍
4、穩(wěn)定性好:批內(nèi)CV=5.50%,批間CV=3.32%,試劑盒2~8℃存放3個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.2%。6、回收試驗(yàn): X =102.3%。7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。且特異性強(qiáng),不受類(lèi)SOD物質(zhì)的干擾8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
腦啡肽原B(PDYN)英文名:PDYN ELISA Kit乙脫氫2型抗體包裝5g
腦啡肽原A(PENK)英文名:PENK ELISA Kitγ-基丁脫氫抗體包裝1g
腦腸肽(Gehrelin)英文名:Gehrelin ELISA Kit衰老相關(guān)蛋白5抗體包裝25g
腦腸肽(BGP/Gehrelin)英文名:BGP/Gehrelin ELISA Kit磷化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體包裝5g
末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)英文名:TCC C5b-9 ELISA Kit釉基質(zhì)蛋白抗體包裝1g
膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)英文名:ANX-Ⅴ ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝25g
繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)英文名:AMH ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g
苗條受體(LR/Ob-R)英文名:LR/Ob-R ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝1g
免疫球蛋白M(IgM)英文名:IgM ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝5g
免疫球蛋白G4(IgG4)英文名:IgG4 ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝1g
免疫球蛋白G2(IgG2)英文名:IgG2 ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝5g
免疫球蛋白G1(IgG1)英文名:IgG1 ELISA Kit錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激ANKK1抗體包裝1g
免疫球蛋白G(IgG)英文名:IgG ELISA Kit磷化內(nèi)收蛋白抗體包裝25g
免疫球蛋白E(IgE)英文名:IgE ELISA Kit膜粘連蛋白11抗體包裝5g
免疫球蛋白D(IgD)英文名:IgD ELISA Kit膜粘連蛋白13抗體包裝100mg
肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體免疫球蛋白G(IgG)Torezolid (TR-701; tedizolid) is a novel oxazolidinone for gram-positive infecti
乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒50管/48樣黑木耳 N-甲基-D-脯氨補(bǔ)體因子BbElisa
黃桿 4-乙氧羰基-3-乙氧基補(bǔ)體因子DElisa
枯草芽孢桿 1-乙基環(huán)己基碳酸酯補(bǔ)體因子HElisa
檸檬形克勒克酵母 6-喹啉-2-酮不對(duì)稱(chēng)二甲基精Elisa
球孢白僵 2--3-三氟甲基-5-硝基吡啶層粘連蛋白Elisa
Rhizobium alkalisoli 2-羥基-5-硝基-3-三氟叉頭框C2Elisa
產(chǎn)腸大腸埃希氏 7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽酸鹽叉頭型基因P3Elisa
產(chǎn)朊假絲酵母 4-溴酮腸三葉因子Elisa
蘇云金芽孢桿 3-甲酸甲腸脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa
假單胞 四丁基氟氫超敏C反應(yīng)蛋白Elisa
粉狀畢赤酵母 白屈菜酸超敏游離雌三Elisa
灰樹(shù)花G25 D-3-溴苯超氧化物歧化Elisa
葡萄牙鏈霉 N-Boc-5-甲氧基沉默調(diào)節(jié)蛋白1Elisa
谷糠乳桿 5-氨基間苯二甲酸二甲酯成骨生長(zhǎng)肽Elisa
秀珍菇 10-(2,5-二羥基苯基)-10H-9-氧雜-10-磷雜菲-10-氧化物成熟BNPElisa
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。