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          苯丙氨酸解氨酶提取試劑

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          更新時(shí)間:2022-07-05 09:21:46瀏覽次數(shù):288

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 500ml
          貨號(hào) FS-R6547 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
          主要用途 僅供科研 貨號(hào) FS-R6547
          產(chǎn)品分類:細(xì)胞組分分離
          儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月
          用途:主要用于裂解植物組織,提取苯丙氨酸解氨酶。
          注意事項(xiàng):苯丙氨酸解氨酶( L-phenylalanine ammonia-lyase ,PAL)是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類可溶性部分物質(zhì),是1961年J.Koukol在大麥中發(fā)現(xiàn)的,推測(cè)其分子量約為30萬(wàn),這是一個(gè)可把苯丙氨酸用于酚

          詳細(xì)介紹

          產(chǎn)品分類:細(xì)胞組分分離

          儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月

          用途:主要用于裂解植物組織,提取苯丙氨酸解氨酶。

          注意事項(xiàng):苯丙氨酸解氨酶( L-phenylalanine ammonia-lyase ,PAL)是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類可溶性部分物質(zhì),是1961年J.Koukol在大麥中發(fā)現(xiàn)的,推測(cè)其分子量約為30萬(wàn),這是一個(gè)可把苯丙氨酸用于酚類化合物合成的酶。

          公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購(gòu)!

          產(chǎn)品名稱

          規(guī)格

          貨號(hào)

          苯丙氨酸解氨酶提取試劑

          500ml

          FS-R6547

           

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          配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:

          1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;

          EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

          2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。

          配制步驟:

          1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。

          2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。

          3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。

          13.jpg 

           

          實(shí)驗(yàn)方法與判定:

          1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

          2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。

          3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

          4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

          使用方法:

          1.  常用篩選濃度

          注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。

          一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

          2. 殺滅曲線的建立

          注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。

          1)  第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。

          2)  根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

          3)  第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

          4)  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

          5)  按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

          3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

          1)  轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

          注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

          2)  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

          3)  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。

          4)   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

          5)   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

          福噴丁(標(biāo)準(zhǔn)品) Fudosteine鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體包裝250mg

          (標(biāo)準(zhǔn)品) Fudosteine半胱蛋白蛋白-6抗體(C端)包裝50mg

          福昔明(標(biāo)準(zhǔn)品) Rocuronium Bromide周期A2抗體包裝1g

          可君(標(biāo)準(zhǔn)品) Roxithromycin鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體包裝25g

          萘酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Roxithromycin鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2b/2γ抗體包裝5g

          魯唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Selegiline HCl凋亡敏感性基因抗體包裝100g

          培(標(biāo)準(zhǔn)品) 3-Azabicyclo (3.3.0) Octane HCL天冬-胱特異性蛋白家族抗體包裝500g

          塞膦(標(biāo)準(zhǔn)品) Sertraline HCL半胱蛋白-10抗體包裝1g

          塞膦鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Sertraline HCL半胱蛋白蛋白-12抗體包裝5g

          托那韋(標(biāo)準(zhǔn)品) SN38(7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin )半胱蛋白蛋白-13抗體包裝100g

          聯(lián)芐(標(biāo)準(zhǔn)品) SparfloxacinCD10抗體包裝25g

          聯(lián)芐唑(標(biāo)準(zhǔn)品) SparfloxacinCD105抗體包裝5g

          聯(lián)雙酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Afloqualone干生長(zhǎng)因子受體/表面分化抗原抗體包裝1g

          鏈脲佐菌(標(biāo)準(zhǔn)品) Afloqualone離子通道蛋白2抗體包裝25g

          兩性霉B(標(biāo)準(zhǔn)品) Sufacetamide sodium角蛋白5抗體包裝5g

          大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR纖維蛋白原試劑盒脫氫紫堇堿;Dehydrocorydal

          黑木耳Auricularia│auricula 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物試劑盒天冬酰;L-Asparagine

          紅曲霉Monascus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:純度大于98%纖溶原試劑盒L-天冬;L-Aspartic ac
          苯丙氨酸解氨酶提取試劑phospho-P53 (Ser46) /FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG硫化汞 紅色硫化汞 CP

          phospho-P53 (Ser6)/FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG-2-萘酯 98%

          phospho-P53 (Ser9)/FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG4-肼 AR,≥98.0%

          phospho-P53 (Thr18) /FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG2-亞硝-1-萘 98%

          phospho-P53 (Thr81)/FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG正壬烷 standard for GC, ≥99.5% (GC)

          phospho-P53 (Ser20)/FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG正壬烷 99%

          phospho-P53 (Ser315)/FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG正壬烷 , ≥99.8% (GC)

          phospho-P53 (Ser33) /FITC  熒光標(biāo)記化腫瘤抑制因P53IgG硝氮黃 Indicator


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