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        1. 東曹(上海)生物科技有限公司

          原來氨基柱可正反相使用!

          時間:2016-5-20 閱讀:2819
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          1.氨基柱既可以正相使用,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中,例如LUNA氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中。
          2. 正相使用
          新柱子可直接用流動相。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再根據(jù)流動相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積,zui后換成流動相。
          正相使用時,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物(質(zhì)量不好的yi醚、四氫呋喃含有少量)。
          任何時候更換流動相時都要確保新流動相與柱子原保存液可互溶。
          3 反相使用
          先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子。
          以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0),立即用水( 0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動相。
          配制流動相時,應(yīng)各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調(diào)pH值時要精密到0.1。
          反相條件下使用時,要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險,流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險。的pH范圍在pH 3.0-7.0
          如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
          有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時,酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
          4 色譜柱的沖洗:簡單說起來,正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱就參照C18的清洗方法。
          5 色譜柱的保存
          正相使用時,將柱子沖洗干凈后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。
          反相使用時,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;長期不用時需將甲醇依次用異丙醇、氯仿置換,zui后用正己烷保存。

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