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FITC 全國(guó)各地廠家現(xiàn)貨供應(yīng),免費(fèi)物流,送貨上門(mén)。
規(guī)格:100MG
庫(kù)存:廠家現(xiàn)貨
用途:科研試驗(yàn)
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FITC 廠家現(xiàn)貨直銷(xiāo)。上海士鋒生物提供上萬(wàn)種是試劑產(chǎn)品,主要生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)進(jìn)口試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)室耗材,抗體等。本公司多年專(zhuān)業(yè)提供科研試劑,質(zhì)量保證,價(jià)格低,國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及國(guó)內(nèi)各大院校長(zhǎng)期供應(yīng)商.凡購(gòu)買(mǎi)公司產(chǎn)品都可成為我公司會(huì)員,以后采購(gòu)均享受“八折”優(yōu)惠,如有需要,可購(gòu)買(mǎi)!
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操作步驟
方法一 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.6 碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
方法二 用于檢測(cè)未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔 中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。
同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml, 37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
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