等度液相色譜分析儀是一種常用的液相色譜分析儀器,其工作原理是基于不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離的。在分離過(guò)程中,流動(dòng)相攜帶樣品通過(guò)色譜柱,樣品中的各組分在色譜柱上發(fā)生吸附、解吸、擴(kuò)散等過(guò)程,從而實(shí)現(xiàn)分離。分離后的組分依次進(jìn)入檢測(cè)器,檢測(cè)器將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào),最后由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行處理和分析。
等度液相色譜分析儀主要由輸液泵、檢測(cè)器、色譜柱、進(jìn)樣系統(tǒng)以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。其中,輸液泵負(fù)責(zé)提供穩(wěn)定、精確的流動(dòng)相;檢測(cè)器用于檢測(cè)樣品組分;色譜柱則是分離樣品的關(guān)鍵部件;進(jìn)樣系統(tǒng)負(fù)責(zé)將樣品注入色譜柱;數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)則負(fù)責(zé)收集、處理和分析檢測(cè)數(shù)據(jù)。
等度液相色譜分析儀在使用過(guò)程中,需要注意以下事項(xiàng):
1、流動(dòng)相選擇與處理
選擇合適試劑:流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭⒏呒兯螂p蒸水,酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用。
定期更換:水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換(一般不超過(guò)2天),防止長(zhǎng)菌變質(zhì)。
正確放置:使用雙泵時(shí),若所用流動(dòng)相中有含鹽流動(dòng)相,則A、D(進(jìn)液口位于混合器下方)放置含鹽流動(dòng)相,B、C(進(jìn)液口位于混合器上方)放置不含鹽流動(dòng)相。
2、樣品準(zhǔn)備與處理
過(guò)濾與離心:采用過(guò)濾或離心方法處理樣品,確保樣品中不含固體顆粒。
溶劑制備:用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱(若為反相柱,則極性比流動(dòng)相大;若為正相柱,則極性比流動(dòng)相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?,盡量用流動(dòng)相制備樣品液。
3、儀器操作與維護(hù)
啟動(dòng)順序:先開(kāi)高壓恒流泵和紫外檢測(cè)器,待紫外檢測(cè)器自檢完畢,回到默認(rèn)波長(zhǎng)254nm后,打開(kāi)工作站軟件。
關(guān)閉順序:先按泵停止,關(guān)閉氘燈,退出工作站軟件,然后再關(guān)儀器。
管路連接:將管子完q插入開(kāi)口端,直至其與開(kāi)口端的末端相碰為止,避免產(chǎn)生死體積。
日常維護(hù):保持流動(dòng)相儲(chǔ)液器的清潔,使用HPLC級(jí)的溶劑,對(duì)試劑含有緩沖鹽及非HPLC級(jí)的流動(dòng)相一定要用0.5μm過(guò)濾器除去其中的微粒物質(zhì)。
4、安全注意事項(xiàng)
安裝條件:實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)水平、穩(wěn)固,并具有足夠的放置空間;避免在具有腐蝕性氣體、大量灰塵或能產(chǎn)生強(qiáng)磁場(chǎng)的地方安裝本儀器。
通風(fēng)要求:由于儀器所用溶劑是易燃并且有毒,故安裝設(shè)備的房間應(yīng)徹d通風(fēng),且具有向外排風(fēng)的裝置。
電源要求:必須安裝四個(gè)以上三芯電源插座(220V 5~10A),并確保儀器電源的電壓穩(wěn)定在交流(220±22)V。
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