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經(jīng)驗(yàn)分享：
1.原代細(xì)胞鋪満瓶底后棄原液，PBS沖洗2次。
2.加入0.25%Trypsin-0.02%EDTA,量覆蓋瓶底即可，室溫作用，鏡下觀察至組織塊周圍的細(xì)胞回縮，立體感增強(qiáng)。
3.棄去消化液，PBS輕漂一遍(目的是除去EDTA，它對(duì)脆弱的原代細(xì)胞很不好)但不要用力搖晃，以免部分消化稍過(guò)的細(xì)胞流失。
4.加入培養(yǎng)液吹打，不要產(chǎn)生氣泡，對(duì)細(xì)胞有損。
5.吸出2/3的懸液傳入新瓶。
6.向原瓶中余下的1/3細(xì)胞懸液中補(bǔ)加2/3的新培養(yǎng)液，與未消化的組織塊繼續(xù)培養(yǎng)。
7. 24小時(shí)內(nèi)新的細(xì)胞又從組織塊中爬出啦，等鋪滿后再如上所述做一次吧。
注：
1.只有當(dāng)原代培養(yǎng)時(shí)組織塊較多時(shí)才這樣做，否則得不償失。
2.保留1/3的細(xì)胞是為了讓余下的組織塊在細(xì)胞間作用下迅速健康的生長(zhǎng)。
3.一瓶細(xì)胞以此法處理不要超過(guò)3次。
