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          上海北諾生物科技有限公司
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          地址：
          
                              
          上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
          
                            
          
                                                     
          
              
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                                        www.bnbiotech.com
              
          
          
          
                          
          
          
          網(wǎng)址：
          
          
          www.bnbiotech.com
          
        
          
            
        
          
            
          
            
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          流式檢測細胞樣品的制備
          2013-4-24　　閱讀(1617)
          

          
							
				
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          方案A：組織培養(yǎng)細胞的制備。
          方案B：淋巴組織細胞制備。
          方案C：非淋巴組織細胞制備。
          方案D：全血PBMC的分離。
          小貼士
          1、流式細胞儀檢測需要將細胞制備成單細胞懸液。
          2、避免細胞成團，以免堵塞流式細胞儀。
          3、實體組織制備單細胞懸液需要物理方法分離或酶消化法進行，具體組織的方法，依照經(jīng)驗來進行。

          方案A: 組織培養(yǎng)細胞的制備
          實驗材料：
          Accutase™ 酶細胞分離培養(yǎng)基 （eBioscience Cat. No. 00-4555）
          eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222）
          15ml或50ml的離心管。
          實驗流程：
          1、如果是懸浮細胞，則小心將細胞移入離心管中，進行計數(shù)和活力分析。進行步驟3.
          2、如果是貼壁細胞，建議使用Accutase™ 酶細胞分離培養(yǎng)基 （eBioscience Cat. No. 00-4555）是細胞團塊分離，制備成單細胞懸液后置于離心管中計數(shù)和活力分析。（注意:accutase 可能會改變某些細胞表位，應(yīng)該預(yù)實驗觀察避免其干擾檢測）
          3、300g 離心5min。棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細胞，調(diào)整細胞濃度為2×107/ml。

          方案B：淋巴組織細胞制備。
          實驗材料：
          60×15mm 的組織培養(yǎng)皿
          5ml 注射器
          細胞過濾器（尼龍網(wǎng)過濾）
          eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222） 
          15ml或50ml的離心管。
          實驗方案：
          1、獲取組織（脾臟，淋巴結(jié)或胸腺）加入5~10ml eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222），使用5ml注射器注射心研磨組織（或采用兩片載玻片研磨亦可）。 
          2、收集磨碎的細胞懸液，過濾至離心管中計數(shù)和活力分析。 
          3、300g 離心5min。棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細胞，調(diào)整細胞濃度為2×107/ml。

          方案C：非淋巴組織細胞制備。
          剪刀和手術(shù)刀片
          剪刀和手術(shù)刀片 
          PBS 
          60×15mm 的組織培養(yǎng)皿 
          5ml 注射器 
          細胞過濾器（尼龍網(wǎng)過濾） 
          eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222） 
          15ml或50ml的離心管。
          實驗流程:
          1、獲取組織剪碎或切碎組織為2~4mm碎塊，用PBS稀釋適量的酶進行消化（溫度，方法依照酶的說明書）。 
          2、小心分離細胞團塊，過濾除去死細胞和碎片。 
          3、300g 離心5min，棄去上清。加PBS 5ml 300g 離心5min，棄去上清，重復(fù)一次。計數(shù)和活力分析。 
          4、300g 離心5min，棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細胞，調(diào)整細胞濃度為2×107/ml。

          方案D：全血PBMC的分離。
          實驗材料： 
          PBS 
          Ficoll® 淋巴細胞分離液 
          eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222） 
          15ml或50ml的離心管。
          實驗流程： 
          1、以PBS 1:1稀釋血樣。將血樣輕輕加到2ml Ficoll® 淋巴細胞分離液或其他品牌亦可。 
          2、1000g離心20min,小心吸取分離液和PBS之間的霧狀細胞，即為PBMC。至新的離心管中。 
          3、4度，300g 離心5min,棄上清。應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細胞，計數(shù)和細胞活力，調(diào)整細胞濃度為2×107/ml。
          
      
          
      
      
          
    
          
    
          
  
          

          
		 







  
    
    				
			 
    
    

    

     
      
     
	 

 	
	
	


          
	
          
		
          
			
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