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做動(dòng)物實(shí)驗(yàn),zui先要做的事情就是要養(yǎng)好動(dòng)物。掌握好動(dòng)物飼料、飲水及其生活環(huán)境,這對(duì)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的成功是zui基本的保證。這是看似一個(gè)平常,但卻有著不少細(xì)節(jié)的問(wèn)題。為了本版廣大站友能在整體上提高對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)的認(rèn)識(shí),做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的*步,特此開(kāi)設(shè)本貼討論動(dòng)物飼養(yǎng)的問(wèn)題。希望大家能踴躍參與,以更多的實(shí)例來(lái)充實(shí)、豐富本貼。
擬分以下幾個(gè)方面來(lái)討論:
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇概述
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如何辨雌雄
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的適應(yīng)性飼養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料(普通飼料、特殊飼料)
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飲水
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的籠具
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的墊料
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理(造模后)
貼子中如有不當(dāng)之處,請(qǐng)大家不吝指出!
*、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如何選擇?這個(gè)問(wèn)題對(duì)于藥理和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專(zhuān)業(yè)的朋友來(lái)說(shuō),不是難事。但對(duì)于需要做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的其它專(zhuān)業(yè)的朋友來(lái)說(shuō),有時(shí)候會(huì)感到茫然?;蛘邲](méi)有自己的思考,照抄別人的做法。對(duì)于這一部分站友,我們不可能要求去系統(tǒng)學(xué)習(xí)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》,但我們可以常備一本在身邊。在需要用的時(shí)候翻一翻,將會(huì)使你豁然開(kāi)朗。因?yàn)闀?shū)中比較詳細(xì)地介紹了常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的解剖生理、生物學(xué)習(xí)性等等,zui主要的是它為你選擇什么樣的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供了重要的參考。
因此,系統(tǒng)學(xué)習(xí)或者零星地翻閱《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》是保證合理選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基礎(chǔ)之一。再者就是要參考大量文獻(xiàn)。在此,我不想對(duì)這一問(wèn)題全面展開(kāi),只是提幾點(diǎn)原則和方法。
*,做什么樣的實(shí)驗(yàn)?什么動(dòng)物適合本實(shí)驗(yàn)? 做什么實(shí)驗(yàn),這是選題時(shí)就確定好了的??隙ㄊ墙?jīng)過(guò)論證的。無(wú)需多講。 用什么樣的動(dòng)物呢?我想,大多是參照文獻(xiàn),再結(jié)合自己對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的了解。選題之時(shí)就肯定閱讀過(guò)很多文獻(xiàn)了,因此不會(huì)陌生。如:做高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化,我想大多數(shù)人會(huì)選擇大鼠、兔子,也可以選金黃地鼠、鵪鶉,少數(shù)人會(huì)選小鼠,但我想用狗和猴的基本上不會(huì)有吧。因?yàn)橐x擇比較容易形成此疾病的動(dòng)物,且要易得。 所以,對(duì)于不太熟悉的人來(lái)說(shuō),要多看文獻(xiàn),參考別人是如何選擇的。就算是對(duì)動(dòng)物比較了解,系統(tǒng)學(xué)過(guò)這方面知識(shí)的,也要多看文獻(xiàn),綜合權(quán)衡。切忌隨意地憑空想像。
第二,采取什么樣的方法造模? 做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通常是要造模的。選擇什么樣的方式?這要從實(shí)驗(yàn)的目的及條件入手。造糖尿病,可以用手術(shù),也可以用藥物。其中藥物有四氧嘧啶及鏈脲佐菌素(STZ)。后者用得較多,且為認(rèn)同。而四氧嘧啶目前用得較少了。造模方法一是參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》,二是參照文獻(xiàn)。造模方法有時(shí)也決定了你的動(dòng)物選擇。像做手術(shù)造動(dòng)脈粥樣硬化,我想用大鼠比小鼠來(lái)得方便吧?
第三,經(jīng)費(fèi)承受能力如何? 做實(shí)驗(yàn)也要精打細(xì)算。不可能為了所謂的高水平、技術(shù)而不顧實(shí)驗(yàn)室的條件。像做高脂動(dòng)物模型,假設(shè)經(jīng)費(fèi)只有一萬(wàn)多元,一定要弄個(gè)敲除APoE基因的小鼠來(lái)做,恐怕沒(méi)人認(rèn)同。做一個(gè)簡(jiǎn)單的鎮(zhèn)痛抗炎實(shí)驗(yàn),你非得要用SPF實(shí)驗(yàn)室,這也是不太實(shí)際的,也是沒(méi)必要的。就像一個(gè)剛剛能滿(mǎn)足溫飽的人突然要花上很多錢(qián)去國(guó)外旅游一樣,是不切實(shí)際的。因此,實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)讓我們有時(shí)不能達(dá)到理想的狀態(tài)。但是,科研并不一定是要用的技術(shù)、的動(dòng)物,而是要能解決問(wèn)題。能用簡(jiǎn)單的技術(shù)、普通的動(dòng)物解決問(wèn)題的,就不必去盲目追求更高。過(guò)于理想化、不考慮經(jīng)費(fèi)問(wèn)題,是不少研究生初涉實(shí)驗(yàn)時(shí)的通病。
第四,多了解一下實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問(wèn)題。有不少人做實(shí)驗(yàn)時(shí)根本沒(méi)有考慮可能出現(xiàn)的失誤,因而在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)茫然無(wú)措。即使是造同樣的疾病模型,不同的動(dòng)物表現(xiàn)可能有不一樣的地方。要對(duì)這些問(wèn)題有充分的了解,并要進(jìn)行必要的預(yù)試。要了解動(dòng)物的習(xí)性,并進(jìn)行必要的護(hù)理。 因此,在你決定了選擇何種動(dòng)物,以何種方式造模之后,實(shí)際上,你就要對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程有全面的計(jì)劃,并對(duì)可能出現(xiàn)的問(wèn)題有應(yīng)對(duì)的措施。
第二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如何辨雌雄?
這個(gè)問(wèn)題應(yīng)該是每個(gè)初涉動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的人完*全掌握的,是不容許有任何一點(diǎn)差錯(cuò)的。 如何辯?當(dāng)然是看生殖器了。一般大動(dòng)物好辯,像狗,猴等;小動(dòng)物及中等大小的體型的難辨一點(diǎn),如:小鼠、大鼠、兔??捎邢铝蟹椒▉?lái)鑒別:
1. 看肛門(mén)與生殖器之間的距離:雄性隔得遠(yuǎn),雌性隔得近。雄的生殖器與肛門(mén)間有陰囊,不過(guò)幼齡時(shí)不太明顯。
2. 雄性陰莖朝頭的方向突出,可輕輕擠壓包皮使其露出而確認(rèn)。雌性較小時(shí)可見(jiàn)閉合的陰道口,擠壓亦可張開(kāi)。像兔、豚鼠等,陰莖短小,故較難辨認(rèn)。是擠壓生殖器以確認(rèn)。看得熟練了,其實(shí)也不難。生殖器處呈O型者,為公的;生殖器處呈V型,下端裂縫延至肛門(mén)者,為母的。這主是針對(duì)幼齡的動(dòng)物而言。
3. 看乳頭或睪丸。成年的動(dòng)物比較好辯認(rèn)。母的有乳頭,雄的有睪丸。但在比較小的時(shí)候,乳頭,睪丸并不是那么明顯的。
辨雌雄的目的就是為了分籠飼養(yǎng),避免雌雄同籠而交配,無(wú)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。不過(guò),即使是同性的放在一籠,有些細(xì)節(jié)仍值得注意。 說(shuō)一個(gè)小插曲:本人有一次將兩批做實(shí)驗(yàn)剩下的小鼠弄到一個(gè)籠里。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大的小鼠不斷追逐小的小鼠,且試圖交配。一師妹在旁說(shuō),是不是我弄了只雌的進(jìn)去了?我仔細(xì)檢查了一下,根本沒(méi)有弄錯(cuò)。放回去,過(guò)了一會(huì)兒又發(fā)現(xiàn)如此現(xiàn)象。后來(lái)我想可能是因?yàn)榇蟮男∈螅?5g~30g)已*性成熟,在找不到雌性的情況下來(lái)追小的雄性小鼠(15g~18g)以獲得性的滿(mǎn)足。這豈不成了“同性戀”?因此,動(dòng)物的日齡相差太大的不要放在同一個(gè)籠里,以免發(fā)生上述現(xiàn)象。當(dāng)然,一般而言,一個(gè)籠子養(yǎng)多個(gè)動(dòng)物的主要是小鼠、大鼠、豚鼠、金黃地鼠等小動(dòng)物,像兔子、狗一般都是一個(gè)籠子一只。 剛開(kāi)始一定要認(rèn)真仔細(xì)地觀察,這樣會(huì)有一些經(jīng)驗(yàn)。熟悉以后,可以很迅速很準(zhǔn)確的分出來(lái)。對(duì)初學(xué)者而言,我建議用第2種方法予以確認(rèn)。 一般提供商將動(dòng)物送來(lái)時(shí),都是已經(jīng)分好了雌雄的。但我們?nèi)砸H自進(jìn)行確認(rèn)。一旦有一只混入異性群中,可能給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)極大的影響,甚至前功盡棄。
第2種方法的示意圖如下:(不僅是大、小鼠,也適合于兔、豚鼠等的性別鑒定)
第三 、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的適應(yīng)性飼養(yǎng)
所謂適應(yīng)性喂養(yǎng),是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由繁殖地或供應(yīng)商處搬到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房以后,在實(shí)驗(yàn)之前,為了使之適應(yīng)環(huán)境而喂養(yǎng)幾天的過(guò)程。這一過(guò)程非常重要,卻往往不受人重視。 這一過(guò)程一般至少為期三天,是一周。
為什么要進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)?
1. 因?yàn)閯?dòng)物從一個(gè)地方進(jìn)入到新的環(huán)境之后,它們要自行調(diào)整一下,才能適應(yīng)。就像中國(guó)隊(duì)員到外國(guó)踢足球要倒時(shí)差一樣,動(dòng)物們也要調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)。因?yàn)檫\(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過(guò)程中,動(dòng)物原有的自身節(jié)律受到了影響,需要恢復(fù)或適應(yīng)新的節(jié)律。
2. 在適應(yīng)性喂養(yǎng)期間可密切觀察動(dòng)物是否健康?如果動(dòng)物運(yùn)來(lái)之時(shí)就帶有疾病,則可能在此期間表現(xiàn)出來(lái)。這讓我們對(duì)此有一個(gè)緩沖期。不至于拿有病的動(dòng)物匆匆忙忙在做實(shí)驗(yàn)。雖然不是所有有病的動(dòng)物都在這幾天看得出來(lái),但這幾天確實(shí)給了我們一個(gè)重要的參考。
怎樣使之適應(yīng)?
1. 配置好飼料、飲水、墊料,做好通風(fēng),12h-12h明暗交替。努力使之在“新家”舒服地過(guò)好日子。
2. 密切觀察其毛發(fā)、排泄物、活動(dòng)情況。這是考察動(dòng)物是否有病的外在表現(xiàn)。
3. 注意與實(shí)驗(yàn)室原有飼養(yǎng)的動(dòng)物隔開(kāi)一定的距離。其它動(dòng)物的聲音、排泄的氨對(duì)新來(lái)的動(dòng)物有一定的影響。 如發(fā)現(xiàn)動(dòng)物有個(gè)別狀態(tài)不佳者,應(yīng)立即隔離,并分析原因。有三分之一以上狀態(tài)不佳者,高度懷疑動(dòng)物有疾病。有死亡者,高度懷疑此批動(dòng)物有問(wèn)題。
適應(yīng)性喂養(yǎng),是保證實(shí)驗(yàn)成功的前提之一。在此期間發(fā)現(xiàn)動(dòng)物有病者,應(yīng)更換別的批次動(dòng)物。也有的是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重尚達(dá)不到實(shí)驗(yàn)所要求的大小,這種情況下可適當(dāng)延長(zhǎng)適應(yīng)性喂養(yǎng)的時(shí)間。
第四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料。
飼料是一個(gè)很重要的方面。我們要了解常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本的飼料組成。同時(shí),也要了解造一些疾病模型所需的飼料組份(如:高脂模型,缺鐵性貧血模型等)。因此,下面分普通飼料和特殊飼料兩部分來(lái)講。
A 普通飼料
以常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為例,我們來(lái)討論一下它們飼料的組成。
一是小鼠、大鼠的飼料。以玉米、大豆、麩皮、魚(yú)粉為主,輔以復(fù)合維生素、骨粉、微量元素。一般做成長(zhǎng)圓柱狀形?;蛟淮职粜?。直徑在1cm左右。這樣的飼料又稱(chēng)為顆粒飼料(本人覺(jué)得此名稱(chēng)不妥,是否可稱(chēng)為“條狀飼料‘、“棒狀飼料”?)。顏色一般為大豆黃色。小鼠、大鼠的飼料為全價(jià)飼料,即不需要再添加任何營(yíng)養(yǎng)成分。
二是豚鼠、兔子的飼料。以苜蓿、玉米、大豆、麩皮、魚(yú)粉為主,輔以復(fù)合維生素、骨粉、微量元素。與小鼠、大鼠的飼料相比,主要是苜蓿的比例達(dá)到了40%左右。一般做成細(xì)長(zhǎng)圓柱形。或曰細(xì)棒形。直徑在0.3cm左右。顏色呈帶一點(diǎn)斑駁的青色。豚鼠、兔子的飼料成份基本一樣,只是比例略有不同,一般可以共用。因二者不能自身合成維生素C,所以苜蓿粉的比例較大。但,飼料是加水潤(rùn)濕后,經(jīng)高溫高壓而制成,維C及酶類(lèi)等已部分破壞。豚鼠、兔子飼料不是全價(jià)飼料。因此,在飼料之外,仍要加少許青菜或青草,否則有的狀態(tài)不佳甚至死亡。本人也曾用在飲水中加維C片的方法,但效果似不如直接給予青菜。
三是狗的飼料。以肉粉、玉米、大豆、麩皮、魚(yú)粉為主,輔以復(fù)合維生素、骨粉、微量元素。有膨化飼料。一般要增加肉類(lèi)食物。
四是猴的飼料。猴為雜食性。喂以混合精飼料并輔以蘋(píng)果、葫蘿卜?;旌暇暳辖M成:玉米粉60%,谷粉20%,面粉15%,黃豆粉5%,再加上骨粉、魚(yú)粉、糖、食鹽、維生素等。幼齡動(dòng)物通常要加上奶粉。以前常以上述組分加水混合,做成塊狀,烘干,但現(xiàn)在有膨化顆粒飼料出售。
對(duì)于小鼠,每日的飼料在4~8g,大鼠在15~20g;豚鼠在15~30g。兔在30~80g/kg/天。注意他們的嚙齒類(lèi)動(dòng)物行為,就是喜歡咬東西。因?yàn)樗鼈兊难例X終生生長(zhǎng),于是它們要磨牙。這樣,投予過(guò)多飼料它們也會(huì)浪費(fèi)掉。兔雖屬兔型目,但有類(lèi)似嚙齒目動(dòng)物的行為。
下圖中所示是一些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料配方的百分比(%)。
B 特殊飼料
這里主要是指一些用于造模的飼料。
1. 高脂飼料
這可能是zui常用的一種造模飼料。主要原理是通過(guò)外源性膽固醇、三酯的攝入形成高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型。zui常用的動(dòng)物是大鼠、兔、金黃地鼠。也有用其它動(dòng)物的,但通常以糊劑、乳劑灌胃來(lái)造模。
下面我們來(lái)談?wù)劯咧暳系呐渲啤?/span>
常用配方:豬油 10% 雞蛋黃 5% 膽固醇 1~2% 丙基硫氧嘧啶 0.2% 普通飼料 82.8~83.8% 另可酌加膽酸鹽 0.2% 左右,維生素D3等。
原理:豬油富含三酯;雞蛋黃是天然食物中含膽固醇zui高的;丙基硫氧嘧啶有助于成模,因甲狀腺素促進(jìn)膽固醇的分解,而丙基抑制其作用;膽酸鹽主要是促進(jìn)膽固醇的吸收;維生素D3主要是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成。
制法:膽固醇鱗片狀,研細(xì);丙基研細(xì);二者充分混合。取雞蛋煮熟,剝?nèi)〉包S,捏碎,吹干,研成細(xì)粉,與前二者混合好。如要加膽酸鹽、維生素D3,亦將其混合好。然后以“等量遞增法”將上述藥料加入到普通飼料粉末中。再將豬油化開(kāi),噴灑在飼料粉末之中混勻。混好之后噴適量水為黏合劑,加到制粒機(jī)中制成棒狀飼料。
在此,特別提出“等量倍增法”。因上述造模藥料與普通飼料的量相差懸殊,直接加入其中是難以混勻的。這樣會(huì)造成以后動(dòng)物攝入的造模的膽固醇,三酯差異大,不利于實(shí)驗(yàn)。所謂“等量遞增法”就是:將上述藥料入差不多相等的普通飼料粉末充分混勻;得混合物后,再加與此混合物相等量的普通飼料混合,充分混勻;如此類(lèi)推。比如:藥料為200g,*次混合后即為400g,第二次混合后為800g…這樣就成倍地混合好。因此,又稱(chēng)為“等量倍增法”。因?yàn)橄嗟攘康牟煌镔|(zhì)混合時(shí),相互混入對(duì)方的機(jī)率zui大,zui容易混勻。學(xué)過(guò)藥劑的朋友們是非常熟悉的,這在中藥的散劑中就是這樣做的。沒(méi)學(xué)過(guò)這個(gè)方法的朋友要特別關(guān)注。
目前有些飼料供應(yīng)商稱(chēng)可以提供現(xiàn)成的高脂飼料。一則他們很多根本就是胡亂地加入其中的,極不均勻,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)。二則他們做的飼料中造模藥的比例不一定符合你的要求。很少有人懂得“等量倍增法”的原理及實(shí)用價(jià)值。因?yàn)槟壳帮暳闲袠I(yè)中專(zhuān)業(yè)人士多不會(huì)在一線(xiàn),而是做管理工作。做飼料的多是沒(méi)有專(zhuān)業(yè)知識(shí),而只是稍加培訓(xùn)甚至沒(méi)有培訓(xùn)的普通工人。當(dāng)然,“等量倍增”的做法很簡(jiǎn)單,關(guān)鍵是要有這樣的專(zhuān)業(yè)意識(shí)。做此飼料時(shí),全程跟蹤,這樣才會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果心中有數(shù)。
在此,我一而再,再而三地強(qiáng)調(diào)“等量倍增法”配制飼料,就是為了站友們減少在此類(lèi)實(shí)驗(yàn)中的誤差。因?yàn)?,有人?wèn)我,為什么他們的高脂組有些動(dòng)物的血脂幾乎跟正常組沒(méi)有顯著差異,而有的又高很多,標(biāo)準(zhǔn)差如此地大?我*時(shí)間想到的就是飼料的配制是否有問(wèn)題。如果飼料沒(méi)配好,實(shí)驗(yàn)可能前功盡棄。 因此,不厭其煩地說(shuō)兩句:高脂飼料要親自配,且按要求、按科學(xué)規(guī)律配(等量倍增法)。 飼料成形后,要攤開(kāi)置通風(fēng)處吹干,或以電風(fēng)扇吹干。不要受熱。在春夏之季,尤應(yīng)注意。因其中含有脂肪油類(lèi),且因制飼料時(shí)要經(jīng)過(guò)高溫壓制,放在一起易發(fā)熱、生霉。有人置冰箱保存,實(shí)不妥。一則冰箱容量有限;二則飼料中的水分未盡,出冰箱后,冰化,更易生霉,且動(dòng)物不是太喜歡吃冷藏后的飼料。一次配制飼料不宜過(guò)多。一般可配實(shí)驗(yàn)全程所需飼料的一半。后半段根據(jù)前面所消耗的實(shí)際量來(lái)酌性增減。但需給足量,寧多一點(diǎn),不能少。 高脂飼料比普通飼料要軟,易碎。要注意輕拿輕放。底部碎屑可收集起來(lái),再壓制成型。
2. 缺鐵性貧血飼料
3. 缺鋅飼料
第五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飲水
下面我來(lái)介紹一下實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水的要求,以及飲水器具。
A 飲用水
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物級(jí)別的不同,飲用的水也不同。 通常情況下,普通級(jí)動(dòng)物飲水達(dá)到生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)即可。 清潔級(jí)、SPF要求滅菌??筛邷馗邏簻缇?,也可以加次氯酸鈉,或以鹽酸調(diào)PH到2.5~3.0。后者又稱(chēng)之為酸化水。 無(wú)菌動(dòng)物飲水只能高溫高壓滅菌。