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          蛋白質(zhì)技術(shù)專題:血漿游離血紅蛋白測定

          2013-12-5  閱讀(1180)

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          實驗原理
           
          血紅蛋白具有類過氧化物酶活性,可催化H2O2釋放新生態(tài)氧,使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化,由無色zui終變?yōu)樗{紫色。根據(jù)顯色深淺與標(biāo)準(zhǔn)進行比較,可測出其含量。
           
          實驗方法
           
          材料:
           
          1.2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
           
          2.1%H2O2
           
          3.10%醋酸溶液
           
          4.分光光度計
           
          方法:
           
          1.抽取靜脈血2-3ml,枸櫞酸鈉抗凝,離心分離血漿。
           
          2.按下表進行操作,用分光光度計,波長為530nm,以空白管調(diào)零,測定測定管的吸光度。

           
          試劑 (ml)
          測定管
          空白管
          2 g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
          0.5
          0.5
          患者血漿
          0.02
          /
          1% H2O2
          0.5
          0.5
          混勻后室溫放置10min
          10%醋酸溶液
          5.0
          5.0
          室溫放置10min

          3.計算公式
           
          血漿游離Hb(mg/L)=測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×100
           
          實驗結(jié)果計算
           
          參考范圍:0-40mg/L
           
          注意事項
           
          1.一切容器避免血紅蛋白污染;
           
          2.采血要順利,器皿要干燥,檢測血漿要新鮮,及時分離,防止人為溶血;
           
          3.鄰聯(lián)苯胺溶液具致癌性,檢測時要小心,廢液要妥善處理,以免污染;
           
          4.雙氧水要新鮮配置,濃度要準(zhǔn)確。

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