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1.檢品溶液的制備:
取夾竹桃葉碎塊粉末3g,于100ml錐形瓶中加70%乙醇40ml,水浴上浸煮5分鐘,放冷,過濾,濾液(或經(jīng)處理后--方法參照注二)供鑒別用。
[注1]:強(qiáng)心苷的試驗(yàn)都是在較強(qiáng)的堿性條件下進(jìn)行,如果樣品中含有蒽醌,也具有紅色反應(yīng),防礙檢查,因此在檢查前需先檢查有無蒽醌類成分,若有則應(yīng)先將其除去,即將乙醇浸液在水浴上蒸發(fā),殘?jiān)覥HCl3熱溶后過濾,CHCl3液用1%NaOH液振搖,去除蒽醌后,CHCl3液供鑒別用。
[注2]:夾竹桃葉或毛地黃葉綠素,常使醇提液帶較深的綠色,影響反應(yīng)的進(jìn)行。故需將葉綠素除去,具體方法如下:
乙醇浸提液在水浴上揮去大部分乙醇(不讓乙醇揮盡),再加水適量,使含醇量約20%左右,稍熱后即放冷,過濾,濾液即可供試驗(yàn)用,或?qū)V液在水浴上濃縮至糖漿狀,加入95%乙醇10ml溶解再供試驗(yàn)用。
2.鑒別試驗(yàn):
(1)三氯化鐵冰醋酸反應(yīng)(Keller-Kiliani反應(yīng)):取醇提液或經(jīng)處理后的CHCl3或醇液1ml,水浴上蒸干,殘?jiān)苡诒姿?ml中,加入1%FeCl3乙醇液1滴,混合均勻,傾入干燥小試管中,再沿管壁緩慢加入等體積濃硫酸,靜置,二液交界處顯棕色(苷元),漸變?yōu)闇\綠,蘭色,zui后上面醋酸層全呈蘭色或蘭綠色( -去氧糖)。
(2)堿性3.5-二硝基苯甲酸反應(yīng)(Kedde反應(yīng)):取1ml醇浸提液,加入堿性3.5-二硝苯甲酸試劑3~4滴,產(chǎn)和紅色或紅紫色反應(yīng)。
(3)亞硝酰鐵氰反應(yīng)(Legal反應(yīng)):取1ml醇浸提液或經(jīng)處理后的CHCl3或醇液在水浴上蒸干,用1ml吡淀溶解殘?jiān)?,加?.3%亞硝酰鐵溶液4~5滴,混勻,再加入NaOH飽和乙醇液1-2滴,是否呈現(xiàn)紅色(若結(jié)果不明顯可另一取一份供試液如上操作,zui后加NaOH飽和乙醇液0-5ml,觀察二液交界面有無紅色)。
(4)堿性苦味酸(Baljet反應(yīng))
取樣品醇液1ml,加入堿性苦味酸試劑(苦味酸飽和水液與5%NaOH水液等量混合)數(shù)滴,呈現(xiàn)橙或橙紅色。