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實(shí)驗(yàn)步驟
1. LB 培養(yǎng)基
Tryptone | 10 g |
Yeast Extract | 5 g |
NaCl | 10 g |
加水至 1000 mL（pH 7.2，固體培養(yǎng)基加 1.8% 瓊脂粉）。
2. LB 抗性篩選培養(yǎng)基
待滅菌后的 LB 固體培養(yǎng)基溫度降至 50℃左右，加入抗生素儲(chǔ)存液至終濃度 50 μg/mL，即每毫升培養(yǎng)基加抗生素儲(chǔ)存液 1 μL，搖勻后，倒平板。
液體 LB 抗性篩選培養(yǎng)基，在*冷卻后加入抗生素，加入的量與固體培養(yǎng)基相同。
3. LB/Amp/IPTG/X-gal 培養(yǎng)基
在含 100 μg/mL Amp 的 LB 瓊脂平板上加入 40 μL X-gal 貯存液和 40 μL IPTG 溶液，用無(wú)菌玻璃涂布器把溶液均勻涂布于整個(gè)平板表面，超凈工作臺(tái)上吹干后備用。
4. SOC 液體培養(yǎng)基
Tryptone | 20 g |
Yeast Extract | 5 g |
NaCl | 0.5 g |
加入 950 mL 水，*溶解后加入 250 mmol/L 的 KCl 溶液 10 mL，用NaOH 溶液（5 mmol/L）調(diào)節(jié) pH 值至 7.0，雙蒸水定容至 1000 mL 后高壓滅菌。滅菌后降溫至 60℃以下，加入 7.2 mL 50% 葡萄糖溶液。使用前加入5 mL 經(jīng)滅菌的 2 mol/L 的 MgCl2 溶液。
