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微生物學(xué)技術(shù)：紫外線滅菌實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：紫外線滅菌紫外線滅菌是用紫外線燈進(jìn)行的，波長(zhǎng)為200~300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力zui強(qiáng)。在波長(zhǎng)一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強(qiáng)度和時(shí)間的乘積成正比。紫外線殺菌機(jī)制主要是因?yàn)樗T導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成，從而抑制了DNA的復(fù)制。實(shí)驗(yàn)方法紫外線滅菌實(shí)驗(yàn)方法原理由于輻射能使空氣中的氧電離成［O］，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成過(guò)氧化氫（H2O2），O3和H2O2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以，只適用于無(wú)菌室、接種箱、手術(shù)室內(nèi)的空氣及物 -
微生物學(xué)技術(shù)：用比濁法測(cè)定大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線
(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饧?xì)菌生長(zhǎng)曲線的持點(diǎn)及測(cè)定原理，學(xué)會(huì)用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。(二)實(shí)驗(yàn)原理將一定數(shù)量的細(xì)菌，接種于適宜的液體培養(yǎng)基中，在適溫下培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)數(shù)，以菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，生長(zhǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，作出的曲線稱為生長(zhǎng)曲線。該曲線表明細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下群體生長(zhǎng)與繁殖的規(guī)律。一般分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期及衰亡期四個(gè)時(shí)期，各時(shí)期的長(zhǎng)短同菌種本身特征、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件不同而異。比濁法是根據(jù)細(xì)菌懸液細(xì)胞數(shù)與混濁度成正比，與透光度成反比關(guān)系，利用光電比色計(jì)測(cè)定細(xì)胞懸液的光密度(即OD值)， -
微生物學(xué)技術(shù):PCR法檢測(cè)支原體
PCR法是20世紀(jì)80年代中期建立起來(lái)的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，其基本原理是酶促DNA合成反應(yīng)，即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下，經(jīng)DNA聚合酶的作用，使DNA鏈擴(kuò)增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速的特點(diǎn)，但其對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求嚴(yán)格，實(shí)驗(yàn)成本較高，有時(shí)還有假陽(yáng)性的現(xiàn)象出現(xiàn)。1、儀器設(shè)備超凈工作臺(tái)、PCR儀、電泳儀、凝膠成像分析系統(tǒng)、臺(tái)式離心機(jī)、旋渦混懸器等。2、實(shí)驗(yàn)試劑選用美國(guó)Stratagene公司生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒（內(nèi)有引物、陽(yáng)性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照、StrataCleanresi -
微生物學(xué)技術(shù)：高壓蒸汽滅菌實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。實(shí)驗(yàn)方法高壓蒸汽滅菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法原理在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否*極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬海?，?dāng)水蒸汽中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸 -
微生物學(xué)技術(shù)：微生物的接種、分離和培養(yǎng)
一、目的要求1、掌握各種分離、接種方法。2、掌握無(wú)菌操作基本環(huán)節(jié)。二、實(shí)驗(yàn)說(shuō)明微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種，必需從中把它們分離出來(lái)。在保存菌種時(shí)不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多，但基本原理卻是相似的，即將待分離的樣品進(jìn)行一定的稀釋，并使微生物的細(xì)胞（或孢子）盡量以分散狀態(tài)存在，然后使其長(zhǎng)成一個(gè)個(gè)純種單菌落。然而上述工作又離不開接種，即將一種微生物移到另一滅過(guò)菌的培養(yǎng)基上的過(guò)程。三、實(shí)驗(yàn)材料1、恒溫培養(yǎng)箱。2、接種環(huán)、玻璃棒、吸管、酒精燈。3、培養(yǎng)基（上次實(shí) -
微生物學(xué)技術(shù)：微生物鑒定中常用的生化反應(yīng)
實(shí)驗(yàn)原理有些細(xì)菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再變藍(lán)色。細(xì)菌產(chǎn)生的脂肪酶能分解培養(yǎng)基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培養(yǎng)基pH下降，可通過(guò)在油脂培養(yǎng)基中加入中性紅做指示劑進(jìn)行測(cè)試。中性紅指示范圍為pH6.8（紅）～8.0（黃）。當(dāng)細(xì)菌分解脂肪產(chǎn)生脂肪酸時(shí)，則菌落周圍培養(yǎng)基中出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。某些細(xì)菌分泌蛋白酶分解明膠，產(chǎn)生小分子物質(zhì)。如果細(xì)菌具有分解明膠的能力，則培養(yǎng)基可由原來(lái)固體狀態(tài)變成液體狀態(tài)。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成 -
微生物學(xué)技術(shù):微生物的分離純化及稀釋平板菌落計(jì)數(shù)
實(shí)驗(yàn)原理稀釋平板測(cè)數(shù)是根據(jù)微生物在高度稀釋條件下固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的繁殖稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使其成單個(gè)細(xì)胞存在，否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。此記數(shù)方法所計(jì)算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長(zhǎng)出來(lái)的菌落數(shù)，故又稱活菌計(jì)數(shù)。 -
免疫學(xué)技術(shù)專題：非標(biāo)記抗體免疫電鏡技術(shù)
一、原理標(biāo)記抗體法雖然具有許多優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些難以克服的問(wèn)題，如標(biāo)記抗體的分子增大，對(duì)細(xì)胞膜和組織的穿透力減弱；化學(xué)交聯(lián)反應(yīng)對(duì)抗體和酶的活性有所影響；結(jié)合物中未標(biāo)記的抗體可與抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，影響檢測(cè)方法的敏感性等。不標(biāo)記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過(guò)一系統(tǒng)的非標(biāo)記抗體的免疫學(xué)反應(yīng)，對(duì)組織中的抗原進(jìn)行定位檢測(cè)。不標(biāo)記抗體法又可分為用標(biāo)記物顯示和不同標(biāo)記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab′)2，一個(gè)Fab片段與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，一個(gè)Fab是抗體蛋白的結(jié)合片段。在抗
