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免疫學(xué)技術(shù)專題：中性粒細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定
中性粒細(xì)胞（polymorphonuclearleukocyte，PMN）的功能包括粘附、移動(dòng)、吞噬殺菌等，是機(jī)體天然免疫力的重要組成部分。試劑及材料1.白色葡萄球菌2.肉湯培養(yǎng)基3.鹼性美藍(lán)液操作方法1.菌液的制備將白色葡萄球菌接種于中，放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右；置水浴中加熱100℃10min殺死細(xì)菌，用無(wú)菌生理鹽水稀釋成6×108細(xì)菌/ml備用；2.用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl，立即加入盛有20μl肝素（濃度為20U/ml）的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi)，輕輕攪動(dòng)混勻，再加上述葡萄球 -
免疫學(xué)技術(shù)專題：組織病理實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：組織病理組織學(xué)技術(shù)包括、組織學(xué)制片技術(shù)、胚胎學(xué)制片技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)、熒光組化及免疫組化技術(shù)、組織培養(yǎng)技術(shù)、各種特殊顯微技術(shù)、電鏡組織學(xué)技術(shù)。組織學(xué)技術(shù)不但應(yīng)用于組織學(xué)本學(xué)科，并且廣泛應(yīng)用于其他多學(xué)科，如生物學(xué)、解剖學(xué)、病理學(xué)、腫瘤學(xué)、法醫(yī)學(xué)、臨床診斷學(xué)等。實(shí)驗(yàn)方法石蠟切片法冰凍切片實(shí)驗(yàn)方法原理石蠟切片是zui基本的切片技術(shù)，冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。蘇木素與伊紅對(duì)比染色法（簡(jiǎn)稱H.E.對(duì)染法）是組織切片zui常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛，對(duì)組織細(xì)胞的各種 -
免疫學(xué)技術(shù)專題：染色質(zhì)免疫沉淀芯片（Chip-Chip）
該技術(shù)能夠快速在目標(biāo)基因組的染色體中確定特異DNA結(jié)合蛋白的準(zhǔn)確結(jié)合位點(diǎn)，ChIP芯片也可以在一個(gè)基因組的任何感興趣的區(qū)域內(nèi)尋找染色體的結(jié)構(gòu)改變。一、ChIP-Chip的用途（1）在基因組范圍內(nèi)確定基因轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合位點(diǎn)和其他DNA結(jié)合蛋白或蛋白復(fù)合體的DNA結(jié)合位點(diǎn)。（2）染色體活性狀態(tài)的定量分析。（3）組蛋白修飾的功能研究。通過用酰基化或甲基化的組蛋白的特異抗體和沒有進(jìn)行修飾的組蛋白的特異抗體，可以確定與組蛋白修飾有關(guān)的結(jié)合模式的變化。（4）聚合酶活性的定量分析。（5）精煉生物信息方法 -
免疫學(xué)技術(shù)專題：斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法（DIGFA）
基本原理斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法是在斑點(diǎn)免疫滲濾測(cè)定法基礎(chǔ)上，改用膠體金標(biāo)記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗(yàn)方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標(biāo)本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應(yīng)。全過程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽(yáng)性結(jié)果在膜上呈紅色斑點(diǎn)。試劑及材料1.滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個(gè)直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強(qiáng)的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點(diǎn)加1-2ml特異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥 -
免疫組化專題：流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀（flowcytometer）是一種能夠探測(cè)和計(jì)數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞檢測(cè)裝置，由于在檢測(cè)中使用的細(xì)胞標(biāo)志示蹤物質(zhì)為熒光標(biāo)記物，因此，用來分離、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀有被稱為熒光激活細(xì)胞分類儀，是分離和鑒定細(xì)胞群及亞群的一種強(qiáng)而有力的應(yīng)用工具。實(shí)驗(yàn)方法流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)方法原理流式細(xì)胞儀的使用一般分為三個(gè)步驟。*，是儀器前階段，包括試劑的準(zhǔn)備，細(xì)胞制備、細(xì)胞的熒光染色；第二，是流式細(xì)胞儀階段，主要是儀器的操作；第三，是結(jié)果分析階段。實(shí)驗(yàn)材料淋巴細(xì)胞外周血的白細(xì)胞 -
免疫組化專題：腫瘤細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)及保種
一.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細(xì)胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細(xì)胞懸液，于1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養(yǎng)基質(zhì)混勻細(xì)胞沉淀，再1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻，備用。另取一個(gè)75cm2方瓶，加入14.0ml培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含腫瘤細(xì)胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，大約3－4天細(xì)胞基質(zhì)會(huì)變黃，5.0ml細(xì)胞懸液可傳代一個(gè)方瓶培養(yǎng)，可用3 -
免疫組化技術(shù)專題：MTT（四唑鹽比色實(shí)驗(yàn)）大匯總
一、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)明確的問題1.選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。這樣，才能保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。2.藥物濃度的設(shè)定。一定要多看文獻(xiàn)，參考別人的結(jié)果再定個(gè)比較大的范圍先初篩。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮 -
免疫組化專題：酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：酶聯(lián)免疫吸附ELISA酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。（2）研究抗酶抗體的合成。（3）顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。（4）定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。實(shí)驗(yàn)方法雙抗體夾心法（測(cè)抗原）間接法（測(cè)抗體）競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)方法原理圖1.雙抗體夾心法測(cè)抗原示意圖本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測(cè)樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色
