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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：鎘--血紅素法測(cè)定組織水平金屬硫蛋白
金屬硫蛋日(metallothionein，MT)是富含金屬及硫的可誘導(dǎo)性蛋白，它可被某些金屬(Bi，Zn，Cu等)、激素（糖皮質(zhì)激素）、細(xì)胞毒藥物（順鉑及烷化劑）及其他與物理化學(xué)刺激相關(guān)的病理生理狀況所誘導(dǎo)。MT廣泛存在于哺乳婁動(dòng)物除結(jié)締組織外的幾乎所有組織中，肝、腎、胰、腸中zui為豐富，從已有的研究中發(fā)現(xiàn)：MT增加可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑及DDP產(chǎn)生耐藥性。耐DDP的細(xì)胞MT含量增加且MTmRNA過(guò)度表達(dá)。DDP耐藥表型的逆轉(zhuǎn)伴隨MT含量增加且MTmRNA過(guò)度表達(dá)；用編碼MT的真核細(xì)胞表達(dá)載 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：免疫篩選實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：免疫篩選根據(jù)抗原-抗體相互作用的原理從群體中選出目的物的技術(shù)。如用抗體檢測(cè)表達(dá)型的基因文庫(kù)所合成的蛋白質(zhì)，從而篩選出目的基因的克隆。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)材料cDNA試劑、試劑盒BHI氯霉素NaOHSSC氯仿異戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸鈉免疫沉淀緩沖液儀器、耗材轉(zhuǎn)子硝酸纖維濾膜離心管微量多孔洗滌儀實(shí)驗(yàn)步驟1.往微量滴定板的每孔中加入250μl含適當(dāng)抗生素的選擇性BHI培養(yǎng)液，并分別接種獨(dú)立的cDNA克隆，37℃溫育過(guò)。2.在250ml燒瓶中加入50mlBHI/抗生素培養(yǎng)液，以1 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：豆粕中尿素酶活性的測(cè)定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諟y(cè)定尿素酶活性的各種方法的基本原理及方法步驟。二、實(shí)驗(yàn)原理將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng)。用過(guò)量的鹽酸溶液中和所產(chǎn)生的氨，再用氫氧化標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴。三、實(shí)驗(yàn)設(shè)備1、樣品篩：孔徑200μm；2、酸度計(jì)：精度0.02pH，附有磁力攪拌器和滴定裝置；3、恒溫水?。嚎煽販?0±0.5℃；4、試管：直徑18mm，長(zhǎng)150mm，有磨口塞子；5、精密計(jì)時(shí)器；6、粉碎機(jī)：粉碎時(shí)應(yīng)不生強(qiáng)熱（如球磨機(jī)7、分析天平．感量0.1mg；8、移 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白質(zhì)的提取及粗分離實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：蛋白質(zhì)提取粗分離分離純化蛋白質(zhì)，首先要從原材料中提取目的蛋白，然后通過(guò)粗分離的方法除去大量雜質(zhì)，zui后進(jìn)行精細(xì)分離，得到目的蛋白。本實(shí)驗(yàn)以新型基因重組人TNF為例闡明重組蛋白TNF的提取及初步分離。實(shí)驗(yàn)方法硫酸銨鹽析法實(shí)驗(yàn)方法原理分離純化蛋白質(zhì)，首先要從原材料中提取目的蛋白，然后通過(guò)粗分離的方法除去大量雜質(zhì)，zui后進(jìn)行精細(xì)分離，得到目的蛋白。本實(shí)驗(yàn)以新型基因重組人TNF為例闡明重組蛋白TNF的提取及初步分離。TNF的提取是將發(fā)酵菌體裂解，在一定的條件和溶液中，使被提取的TNF充分釋放出 -
4，洗脫方式的選擇,離子交換色譜洗脫方式有三種：一是改變緩沖液pH，使蛋白質(zhì)從吸附狀態(tài)變?yōu)榻馕綘顟B(tài)。如在陰離子交換色譜中，通過(guò)降低流動(dòng)相pH使吸附在柱子上的帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶正電，從而達(dá)到解吸附，在陽(yáng)離子交換色譜中則是通過(guò)升高流動(dòng)相pH的方法達(dá)到解吸附；二是增加緩沖液的離子強(qiáng)度，將吸附強(qiáng)的分子從離子交換劑上替換下來(lái)；三是緩沖液pH和離子強(qiáng)度同時(shí)改變。無(wú)論哪一種方法，都可用階段洗脫和梯度洗脫兩種方式進(jìn)行。階段洗脫是用幾個(gè)不同pH緩沖液或幾個(gè)不同鹽濃度的緩沖液逐步進(jìn)行洗脫。即pH和離子強(qiáng)度變化不連
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液相色譜（HighRerformanceLiquidChromatography,HPLC）又叫高壓、高速、近代液相色譜，通常叫做液相色譜。它是60年代中期才建立的一種快速分離化合物的方法，到了70年代后期才廣泛用于蛋白質(zhì)的分離純化方面，現(xiàn)已成為分離純化蛋白質(zhì)非常有效的方法之一。和經(jīng)典常壓色譜相比它有以下特點(diǎn)：1、HPLC分離、純化蛋白質(zhì)的速度快。通常半小時(shí)左右可進(jìn)行一次，大大縮短了純化蛋白質(zhì)的時(shí)間；2、分辯率高。一根長(zhǎng)10cm的色譜柱可分離十幾種以上的物質(zhì)；3、適應(yīng)面廣，靈活性強(qiáng)，幾乎所有的蛋
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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：TNF-α生物學(xué)活性檢測(cè)方法
基本原理TNF的生物學(xué)活性之一是能直接殺傷腫瘤細(xì)胞。TNF與相應(yīng)受體結(jié)合后向細(xì)胞內(nèi)移，被靶細(xì)胞溶酶體攝取導(dǎo)致溶酶體穩(wěn)定性降低，各種酶外泄，引起細(xì)胞溶解。腫瘤細(xì)胞株對(duì)TNF-α的敏感性有很大的差異，用放線菌素D、絲裂酶素C、放線菌酮等處理腫瘤細(xì)胞，可明顯增強(qiáng)TNF-α殺傷腫瘤細(xì)胞活性。材料和試劑1，*培養(yǎng)基（1）10%FCS-DMEM培養(yǎng)液（V/V）。2，*培養(yǎng)基（2）3%FCS-DMEM培養(yǎng)液（V/V）0.5-1μg/ml放線菌素-D。3，0.05%結(jié)晶紫溶液：取50mg結(jié)晶紫，用20ml無(wú)水乙 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：磷酸氨基酸分析實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：磷酸氨基酸分析鑒定蛋白質(zhì)中磷酸化的氨基酸殘基是很有意義的。磷酸化作用發(fā)生在蛋白質(zhì)的絲氨酸、蘇氨酸和酩氨酸時(shí)，通過(guò)部分的HCl水解及接著進(jìn)行雙向薄層電泳，可以便利地鑒定標(biāo)記的磷酸氨基酸。實(shí)驗(yàn)方法酸水解法實(shí)驗(yàn)材料磷酸化蛋白質(zhì)試劑、試劑盒印度墨汁HCl磷酸氨基酸混合物電泳緩沖液茚三酮儀器、耗材PVDF膜烘箱離心機(jī)離心管纖維素薄層色譜濾紙薄層電泳儀實(shí)驗(yàn)步驟1.放射性標(biāo)記的磷酸化蛋白質(zhì)在SDS-聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行制備電泳。電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用水洗膜數(shù)次，不要讓膜變干。2.用30~50ml印度墨
