朗伯-比爾定律(Lambert-Beer law，A=ebc)是分光光度法的基本定律，也是利用分光光度法進行物質定量的理論基礎。該定律描述了特定物質（摩爾吸收系數，e，屬于物質的物理性質）對某一波長光吸收的強弱程度（吸光度，A）與吸光物質的濃度（c）、光程（即溶液厚度，b）之間的關系。
其物理意義是，當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時，其吸光度（A）與吸光物質的濃度（c）、光程（b）均成正比例關系，而與透光率（T）成反比例關系。
（1）入射光為平行單色光且垂直照射；
（2）吸光物質為均勻非散射體系，即待測物需為均一的稀溶液、氣體等，無溶質、溶劑及懸濁物引起的散射；
（3）吸光質點之間無相互作用；
（4）輻射與物質之間的作用僅限于光吸收，無熒光和光化學現象發(fā)生。
由此就可以分析出導致偏離朗伯-比爾定律的原因有以下幾點：
嚴格說來，朗伯-比爾定律只適用于單色光。但由于儀器分辨能力所限，入射光實際為一很窄波段的譜帶。由于分光光度計分光系統(tǒng)中的色散元件分光能力差，即在工作波長附近或多或少含有其他雜色光，雜散光(非吸收光)也會對朗伯-比爾定律產生影響，這些雜色光將導致朗伯-比爾定律的偏離。實際上，理論上的單色光是不存在的，我們所做的只能是讓入射光的光譜帶寬盡可能的小，要盡可能的靠近單色光。
另外，來自出射狹縫的光，其光譜帶寬度大于吸收光譜帶時，則投射在試樣上的光就存在非吸收。這不僅會導致靈敏度的下降，而且使標準曲線向下彎曲，從而偏離朗伯-比爾定律。非吸收光越強，對測定靈敏度影響就越嚴重。并且隨著被測試樣濃度的增加，非吸收光的影響增大。當吸收很小時，非吸收光的影響可忽略不計。
朗伯-比爾定律只適用于稀溶液。當濃度過高時，吸光粒子間的平均距離減小，受粒子間電荷分布相互作用的影響，其摩爾吸收系數發(fā)生改變，導致偏離比爾定律。
在不同的溶劑中，由于溶質和溶劑的作用，生色團和助色團會發(fā)生相應的變化，使吸收光譜的波長向長波長方向移動或向短波長方向移動，即所謂的紅移和藍移。例如，碘在四氯化碳溶液中呈紫色，在乙醇中呈棕色。
朗伯-比爾定律是適用于均勻、非散射的溶液。那么，如果被測試液不均勻，是膠體溶液、乳濁液或懸浮液，則入射光通過溶液后，除了一部分被試液吸收，還會有反射、散射使光損失，導致透光率減小，使透射比減小，使實際測量吸光度增大，使標準曲線偏離直線向吸光度軸彎曲，造成對朗伯-比爾定律的偏離。所以，在分析條件選擇時，應考慮往樣品溶液的測量體系中加入適量的表面活性劑等來改善溶質的均勻度。
朗伯-比爾定律也會受到化學因素的影響。解離、締合、生成絡合物或溶劑化等均會對朗伯-比爾定律產生偏離。離解是偏離朗伯-比爾定律的主要化學因素。當溶液濃度改變，其離解程度也會發(fā)生變化，這將導致吸光度與濃度的比例關系便發(fā)生變化，從而偏離朗伯-比爾定律。
溶液中有色質點的聚合與締合，形成新的化合物或互變異構等化學變化，以及某些有色物質在光照下的化學分解、自身的氧化還原、干擾離子和顯色劑的作用等，都對遵守朗伯-比爾定律產生不良影響。
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