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關(guān)鍵詞：ECL；Western blotting；HRP底物；化學(xué)發(fā)光
1. 產(chǎn)品概述
ECL試劑，即化學(xué)發(fā)光法檢測辣根過氧化物酶（HRP）的底物，是目前Western blotting檢測中zui為靈敏的試劑。目前市場上普通ECL試劑在使用過程中經(jīng)常出現(xiàn)易淬滅、高背景、不穩(wěn)定以及低豐度蛋白難以檢測等問題，影響zui終實驗結(jié)果。
翊圣生物根據(jù)目前市場現(xiàn)狀，集中免疫檢測領(lǐng)域的科研人員，在嚴(yán)格控制魯米諾原料的基礎(chǔ)上，不斷改良增強劑和穩(wěn)定劑配方，針對不同需求開發(fā)了4類ECL試劑，包含增強型、超敏型、持久型和zui高靈敏度型產(chǎn)品，不僅可滿足實驗者對目的蛋白從低豐度到高豐度表達的檢測要求，同時可在不影響實驗的條件下，提高發(fā)光強度，使您獲得的圖像更加清晰。
«的靈敏度——皮克至低飛克級的抗原檢測
«更高的信噪比——發(fā)光底物，降低背景
«更利節(jié)省抗體——優(yōu)化底物系統(tǒng)，更高抗體結(jié)合力
«優(yōu)異的性價比——更高的性能，更低的價格
«的穩(wěn)定性——新型氧化劑，常溫下穩(wěn)定保存1年
2. 產(chǎn)品原理
ECL試劑檢測的核心原理為氧化反應(yīng)發(fā)光：魯米諾（lumino）作為發(fā)光底物的主要成分，在堿性條件下，通過辣根過氧化酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基鄰苯二酸的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到基態(tài)時發(fā)出光子，zui大發(fā)射波長為425 nm，光子信號可通過X射線膠片或CCD成像儀被捕獲。
3. 產(chǎn)品選擇
翊圣目前擁有的4種ECL產(chǎn)品，各具特色，能夠*用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。
那么，您的實驗應(yīng)該選擇哪一種產(chǎn)品呢？
表1 ECL試劑選擇指南
Yeasen | Enhanced ECL 增強型 | Super ECL 超敏型 | SuperDura 持久型 | MaxiSignal zui高靈敏度型 |
適用樣本 | 靶點豐度較高，常規(guī)蛋白樣本 | 靶點豐度低，樣本有限 | 靶點豐度較低，樣本有限 | 靶點豐度極低，樣品珍貴 |
檢測靈敏度 | 中等皮克級 | 低皮克級 | 中等飛克級 | 低飛克級 |
信號持續(xù)時間 | < 2 h | < 12 h | < 24 h | < 8 h |
適用檢測系統(tǒng) | 所有試劑均適用X射線膠片，CCD成像儀 | |||
一抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10,000 | 1:1000-1:50,000 | 1:5000-1:100,000 |
二抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10,000 | 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
推薦用膜 | NC膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 |
存儲穩(wěn)定性 | 室溫1年 | 室溫1年 | 室溫1年 | 4℃ 1年，室溫半年 |
優(yōu)勢 | 同一級別靈敏度中信號zui強 | ，適用于多數(shù)WB實驗 | zui長信號持續(xù)時間，極其適用于多次曝光 | 靈敏度，極其適用于痕量蛋白檢測 |
【注】：推薦抗體稀釋濃度為抗體儲液濃度為1 mg/mL時的稀釋濃度。
4. 產(chǎn)品應(yīng)用
Yeasen ECL試劑對比其他品牌同級別產(chǎn)品具有更佳的使用效果。
圖1 Yeasen ECL超敏型底物Super與其他品牌同級別底物Pico檢測效果比對
圖2 Yeasen ECLzui高靈敏度型底物MaxiSignal與其他品牌同級別底物West Femto檢測效果比對
圖3 Yeasen ECL持久型底物SuperDura與其他品牌同級別底物West Dura檢測效果比對
5. 價格優(yōu)勢
Yeasen致力于為您提供的產(chǎn)品。
圖4 Yeasen ECL產(chǎn)品與其他品牌同級別產(chǎn)品價格比對
6. 常見問題
遇到的問題 | 原因分析 | 推薦解決方法 |
|
膠片出現(xiàn)反影 | 反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多 | 稀釋HRP標(biāo)記物 |
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膠片出現(xiàn)棕色或黃色條帶 |
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熒光猝滅 | |||
操作時間過長，膜逐漸干掉 | 避免膜干掉 |
| |
保鮮膜、顯影液或定影液污染 | 養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣 |
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反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過少 | 增加HRP標(biāo)記物 |
| |
膠片無條帶顯現(xiàn)或者信號較弱 | 轉(zhuǎn)膜的效率低 | 提高轉(zhuǎn)膜效率，用預(yù)染Marker判斷。 |
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抗原、抗體量少或不匹配 | 增加抗原/抗體量或選擇合適抗原/抗體 |
| |
X光膠片有問題 | 曝光后X光譜全黑（而非透明色），則表明膠片已*曝光，使用新的X光片 |
| |
顯影/定影液有問題 | 可預(yù)先曝光一張膠片進行判斷，如有問題當(dāng)換用新的顯影/定影液 |
| |
反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多 | 稀釋HRP標(biāo)記物 |
| |
高背景 | 一抗二抗?jié)舛忍?/span> | 降低抗體濃度，延長封閉時間 |
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抗體未清洗干凈 | 增加洗膜次數(shù) |
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封閉不* | 優(yōu)化封閉條件 |
| |
使用錯誤的封閉劑 | 使用其他的封閉劑 |
| |
過度曝光 | 降低曝光時間 |
| |
抗體特異性差 | 更換抗體 |
| |
反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多 | 稀釋HRP標(biāo)記物 |
| |
條帶有空斑 | 抗原以及二抗的濃度過高 | 稀釋樣品重新跑膠，也可將混合好的顯色液冰浴后，加到膜上即刻快速顯色。 |
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帶型不規(guī)則 | 轉(zhuǎn)膜有氣泡或甲醇（對于PVDF膜）水化不均勻 | 優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件。 |
|
膠片出現(xiàn)斑點 | HRP標(biāo)記物聚集體 | 0.2μm膜過濾HRP標(biāo)記物 |
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非特異性條帶 | 反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多 | 稀釋HRP標(biāo)記物 |
|
SDS引起蛋白非特異性結(jié)合 | 實驗流程中不使用SDS |
| |
抗體特異性差 | 更換抗體 |
| |
封閉不足 | 增加封閉時間或使用其他封閉劑 |
|
7. 訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Super ECL Detection Reagent 化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒 | 36208ES60 | 100 mL | 329.00 |
36208ES76 | 500 mL | 1289.00 | |
36208ES80 | 1000 mL | 2349.00 | |
Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增強型ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒 | 36222ES60 | 100 mL | 259.00 |
36222ES76 | 500 mL | 1089.00 | |
36222ES80 | 1000 mL | 1989.00 | |
SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate 持久性化學(xué)發(fā)光底物 | 36223ES10 | 10 mL | 267.00 |
36223ES60 | 100 mL | 1557.00 | |
36223ES70 | 200 mL | 2857.00 | |
36223ES76 | 500 mL | 5257.00 | |
SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate zui高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物 | 36224ES10 | 10 mL | 287.00 |
36224ES60 | 100 mL | 1757.00 | |
36224ES70 | 200 mL | 3257.00 | |
36224ES76 | 500 mL | 5857.00 |
8. 相關(guān)產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
X射線攝影暗盒（小號） | 36243ES35 | 5×7英寸 | 129.00 |
X射線攝影暗盒（中號） | 36243ES58 | 8×10英寸 | 169.00 |
X光片 | 36209ES01 | 1盒(100片) | 227.00 |
Fixing Powder 定影粉 | 36210ES01 | 包 | 20.00 |
Developing Powder 顯影粉 | 36211ES01 | 包 | 20.00 |
Primary & Secondary Antibody Diluent for WB WB一抗二抗稀釋液 | 36206ES60 | 100 mL | 147.00 |
36206ES76 | 500 mL | 538.00 |
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