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多樣本直接PCR系列專題
More Genotyping, Less Time and Fewer Reagents
PCR-based Genotyping等實驗，常需純化樣本基因組。當(dāng)待測樣本較多時，純化基因組的過程費(fèi)時、操作重復(fù)，并且實驗成本高。翊圣生物通過改造Taq DNA聚合酶，優(yōu)化PCR反應(yīng)體系開發(fā)出無需基因組純化的Direct PCR Kit系列產(chǎn)品。
Clever PCR：Direct PCR
翊圣Direct PCR Kit是直接從樣本開始，以未經(jīng)基因組純化的微量原始樣本（圖1-A）或其裂解產(chǎn)物（圖1-B）作為模板，進(jìn)行PCR-based Genotyping（見圖1）。與常規(guī)PCR-based Genotyping相比，Direct PCR Kit樣本用量少，操作簡單，實驗成本低，可高通量化樣本檢測。
圖1 Direct PCR技術(shù) A. 直接法：取少量樣本直接加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。B. 裂解法：樣本取樣后，加入裂解液中，裂解釋放基因組，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。
技術(shù)優(yōu)勢
★直接：無需進(jìn)行費(fèi)時而昂貴的DNA純化
★快速：10min完成模板制備，zui少50min完成PCR反應(yīng)
★簡便：樣品無需剪碎或研磨即可完成裂解
PCR Mix為預(yù)混液形式，減少加樣步驟
★節(jié)?。?/span>材料用量少
★高通量：可在96孔板中完成裂解反應(yīng)
翊圣生物Direct PCR Kit
產(chǎn)品參數(shù) | Animal Tissue Direct PCR Kit | Mouse Tissue Direct PCR Kit | Plant Tissue Direct PCR kit | Animal Blood Dicrect PCR Kit |
適用生物 | 小鼠、兔子、鳥類、淡水魚、果蠅、線蟲、狗 | 小鼠、大鼠 | 水稻、玉米、煙草、油菜、小麥、大豆等 | 人血、鼠血、雞血、鳥血、牛血、狗血 |
適用組織/材料類型 | 腦、心臟、肝臟、胰臟、腎臟、脾臟、睪丸、肌肉、羽毛末端 | 鼠尾、鼠耳、腳趾（帶肌肉）和其他臟器 | 嫩葉、老葉、幼苗、嫩莖 | EDTA、Heparin抗凝全血、血液的采集卡、冷凍血和抗凝血等 |
樣品使用量 | 5-10mg | 5-10mg | 3-5mg（5-7mm），1-2mg（2-3mm） | 人血2-45%；鼠血2-20%；采集卡1-4mm |
基因組釋放時間 | 10-30min | 10-30min | 10min或無需專門裂解過程 | 無需專門裂解過程 |
PCR產(chǎn)物zui適長度 | ＜1kb | |||
PCR產(chǎn)物是否加A | 裂解反應(yīng)體系加A效率不定 | |||
50µL體系，裂解產(chǎn)物使用量 | 0.5-5µL | 0.5-5µL | 5-10µL | 人血2-45%；鼠血2-20%；采集卡1-4mm |
應(yīng)用 | 轉(zhuǎn)基因鑒定、基因分型等 | 轉(zhuǎn)基因鑒定、基因分型等 | 轉(zhuǎn)基因鑒定、基因分型等 | 基因型，病原微生物鑒定 |
Direct PCR Kit實驗過程
本系列產(chǎn)品運(yùn)用*的蛋白酶裂解體系，裂解樣品，裂解液可直接作為模板，搭配試劑盒中的PCR Master Mix進(jìn)行基因擴(kuò)增。
圖2 動物、小鼠組織直接PCR實驗過程
圖3 動物全血直接PCR實驗過程
圖4 植物組織直接PCR實驗過程
產(chǎn)品優(yōu)勢
Ø 改造的Taq DNA Polymerase是Direct PCR的保證：*的抑制物耐受性
對于非純化樣本作為模板時，會引入很多對PCR反應(yīng)有抑制的成分。以普通的PCR反應(yīng)體系和Taq DNA聚合酶較難得到理想的結(jié)果，甚至無法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。本系列試劑盒中PCR Mix為配方優(yōu)化預(yù)混液，采用改造的Taq DNA Polymerase，增加與模板DNA結(jié)合能力，對于常見PCR抑制劑具有更高的耐受性，因此具有更廣泛的模板適應(yīng)性。
圖5 直接PCR Kit中的PCR Mix具有更高的雜質(zhì)耐受度。相同模板量，用不同的PCR Mix進(jìn)行PCR，同時在體系中加入不同濃度的各種PCR反應(yīng)抑制物。比較不同條件下的PCR產(chǎn)物量。
翊圣生物針對不同樣本，開發(fā)出一系列產(chǎn)品。
一、多動物通用型：Animal Tissue Direct PCR Kit
Ø zui快速：操作時間短
圖6 翊圣動物組織直接PCR試劑盒更加節(jié)省時間。
Ø 實驗例：基因敲除小鼠基因型鑒定
圖7 動物組織直接PCR試劑盒檢測基因敲除動物組織直擴(kuò)結(jié)果。M：100bp DNA ladder。1-8：以裂解產(chǎn)物為模板。+：以50ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。單條帶（580bp）：敲除動物純合子基因組。單條帶（180bp）：野生型基因組。兩條帶（580bp/180bp）：敲除動物雜合子基因組。
二、嚙齒類型：Mouse Tissue Direct PCR Kit
Ø 更快速：基因釋放充分
圖8 小鼠組織直接PCR試劑盒不同裂解時間直擴(kuò)結(jié)果。M：100bp DNA ladder。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。
Ø 更*：基因釋放充分
1、優(yōu)于常規(guī)堿裂解方法
圖9 鼠尾經(jīng)不同裂解方式處理后，直擴(kuò)結(jié)果。檢測基因：SOX21。M：100 bp DNA ladder。1-2：以常規(guī)堿裂解方式處理裂解產(chǎn)物為模板。3-4：以小鼠組織直接PCR試劑盒裂解產(chǎn)物為模板。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。
2、媲美同類產(chǎn)品
圖10 鼠尾經(jīng)不同品牌同類產(chǎn)品裂解處理后，直擴(kuò)結(jié)果。檢測基因：SOX21。M ：100 bp DNA ladder。+ ：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。
三、多動物通用型：Animal Blood Direct PCR Kit
Ø zui大模板耐受度：高達(dá)45%
圖11 不同體積的EDTA抗凝人血加入量，動物血液直接PCR試劑盒直擴(kuò)結(jié)果。檢測基因：SOX2。M：DNA Marker I。循環(huán)數(shù)：30個循環(huán)。
四、植物類型：Plant Tissue Direct PCR Kit
Ø 多類型植物樣本驗證
圖12 不同類型植物葉片直擴(kuò)結(jié)果。M：100 bp DNA ladder。C：相應(yīng)植物純化基因組DNA為模板。1-2：葉片組織裂解產(chǎn)物為模板。循環(huán)數(shù)：30個循環(huán)。
客戶實驗
1、轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定
圖13青島大學(xué)用戶使用鼠尾直接PCR試劑盒擴(kuò)增某基因結(jié)果。M：DNA marker II。1-12：轉(zhuǎn)基因小鼠鼠尾裂解液。13：陽性質(zhì)粒對照。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：30個循環(huán)。
2、水稻基因直擴(kuò)
圖14 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)用戶使用植物直接PCR試劑盒擴(kuò)增水稻相關(guān)基因
訂購信息
產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
10180ES50 | Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒 | 50 T | 326.00 |
10180ES70 | 200 T | 1236.00 | |
10181ES50 | Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠組織直接PCR試劑盒 | 50 T | 326.00 |
10181ES70 | 200 T | 1236.00 | |
10182ES50 | Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 | 50 T | 326.00 |
10182ES70 | 200 T | 1236.00 | |
10183ES50 | Plant Tissue PCR Kit 植物組織直接PCR試劑盒 | 50 T | 326.00 |
10183ES70 | 200 T | 1236.00 |
