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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20 T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40305ES20 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè) |
產品介紹
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒 | 40305ES20 | 20 T | 518.00 | 386.00 |
40305ES50 | 50 T | 1120.00 | 786.00 | |
40305ES60 | 100 T | 1960.00 | 1346.00 |
產品描述
Annexin V-Alexa Fluor488/PI細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor488標記了的Annexin V作為探針，來檢測細胞早期凋亡的發(fā)生，可用流式細胞儀或其他熒光檢測設備進行檢測。
其檢測原理為：在正常的活細胞中，磷脂酰絲\氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36 KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲\氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。
另外，本試劑盒中還提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用來區(qū)分存活的早期細胞和壞死或晚期凋亡細胞。PI是一種核酸染料，它不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但可以透過凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜而使細胞核染紅。因此，將Annexin V與PI聯(lián)合使用時，PI 則被排除在活細胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被Alexa Fluor488 和PI 結合染色呈現(xiàn)雙陽性（Annexin V+/PI+）。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規(guī)格 | ||
40305ES20（20T） | 40305ES50（50T） | 40305ES60（100T） | ||
40305-A | Annexin V-Alexa Fluor488 | 100 μL | 250 μL | 500 μL |
40305-B | PI Staining Solution (20 μg/mL) | 200 μL | 500 μL | 1.0 mL |
40305-C | 1×Binding Buffer | 10 mL | 25 mL | 50 mL |
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。-20 ℃避光長期保存，避免反復凍融，一年有效。
【注】：如果需要在短時間內多次重復使用，可以在4 ℃避光保存，半年有效。
注意事項
1）由于細胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后1小時之內進行分析。
2）對于貼壁細胞，消化是一個關鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞。胰\酶消化時間過短，細胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的損傷，PI攝入過多；消化時間過長，細胞膜同樣易造成損傷，甚至會影響細胞膜上磷脂酰絲\氨酸與Annexin V-Alexa Fluor488的結合。消化時將胰\酶鋪滿孔板底后，輕搖時胰\酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰\酶，利用剩余的少量胰\酶再消化一段時間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會影響Annexin V與PS的結合。
3）如果樣品來源于血液，請務必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V結合，從而干擾實驗結果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
4）試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
5）Annexin V-Alexa Fluor488和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。
6）本產品僅作科研用途！
使用說明
1.1 樣品染色
1. 懸浮細胞：300 g，4 ℃離心5 min收集細胞。
貼壁細胞：用不含EDTA的胰\酶消化后，300 g，4 ℃離心5 min收集細胞。胰\酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。
2. 用4 ℃預冷的PBS洗滌細胞2次，每次均需300 g，4 ℃離心5 min。
3. 吸棄PBS，加入100 μL 1×Binding Buffer重懸細胞。
4. 加入5 μL Annexin V-Alexa Fluor 488和10 μL PI，輕輕混勻。
5. 避光、室溫反應10-15 min。
6. 加入400 μL 1×Binding Buffer，混勻后放置于冰上，樣品在1小時內用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。
【注】：為了避免洗滌細胞時損失細胞，在吸液時可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。
1.2 流式細胞儀分析
Alexa Fluor488最大激發(fā)波長為488 nm，最大發(fā)射波長為519 nm；PI-DNA復合物的最大激發(fā)波長為535 nm，最大發(fā)射波長為615 nm。用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），Alexa Fluor488為橫坐標，PI為縱坐標。每個樣采集10,000 events。
1.3 熒光顯微鏡分析
1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI雙染的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞。
2) 在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。Annexin V-FITC熒光信號呈綠色，PI熒光信號呈紅色。
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產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 細胞凋亡檢測試劑盒 | 40305ES20 | 20 T | 518.00 |
40305ES50 | 50 T | 1120.00 | |
40305ES60 | 100 T | 1960.00 | |
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40310ES50* | 50T | 960.00 | |
40310ES60* | 100T | 1680.00 |
HB211027
