聯(lián)系電話
參考價(jià) | ¥285 |
- 36602ES60 型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
100ml | 285元 | 999 件 可售 |
訪問(wèn)次數(shù):1247更新時(shí)間:2024-05-09 09:29:21
- 聯(lián)系人:
- 曹女士
- 電話:
- 400-6111-883
- 手機(jī):
- 售后:
- 4006-111-883
- 傳真:
- 86-21-34615995
- 地址:
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號(hào)3樓
- 網(wǎng)址:
- www.yeasen.com
掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
---|
產(chǎn)品描述
TMB,即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine,中文全稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺,是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的常用顯色底物之一。在HRP的催化下,TMB被過(guò)氧化氫(H2O2)氧化生成藍(lán)色產(chǎn)物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸終止上述反應(yīng)后,產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,最大吸收峰為450 m。傳統(tǒng)的TMB顯色試劑通常以AB液形式提供(TMB和H2O2溶液分到兩管,僅在使用前才可混合使用),并且容易產(chǎn)生沉淀,使用起來(lái)相對(duì)不方便,且容易導(dǎo)致操作誤差。為克服以上缺點(diǎn),我司采用新的TMB顯色技術(shù),將所有相關(guān)試劑全部混合配成單一溶液。具有以下優(yōu)點(diǎn):
1)即開(kāi)即用,操作簡(jiǎn)單,使用前無(wú)需做AB液混合的準(zhǔn)備;檢測(cè)靈敏度不低于AB液體系;
2)僅由單一溶液組成,簡(jiǎn)化了操作步驟,也降低了操作誤差,結(jié)果更加穩(wěn)定;
3)含有 的穩(wěn)定劑,保證溶液4℃下長(zhǎng)期保存;
4)相比于其他HRP酶顯色底物(如ABTS和OPD)相比,檢測(cè)靈敏度更高,而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有機(jī)溶劑,安全無(wú)毒;
5)另外,TMB溶液可分為沉淀可溶型和沉淀不可溶型,前者適用于ELISA及其他通過(guò)液體反應(yīng)檢測(cè)HRP的應(yīng)用,后者適用于WB或其他通過(guò)沉淀反應(yīng)檢測(cè)HRP的應(yīng)用。
本品為單一溶液形式且沉淀可溶型的TMB顯色液,適用于ELISA檢測(cè),操作時(shí)只需加入200μl即用型的顯色液,做簡(jiǎn)單孵育,加入2M H2SO4終止反應(yīng)后,即可用分光光度計(jì)在450nm處測(cè)定吸光度。本品可供完成約500個(gè)樣品的檢測(cè)。另外,本品也可用于血液或血紅蛋白等樣品中過(guò)氧化物酶量的檢測(cè)。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃避光保存,一年有效。
注意事項(xiàng)
1)TMB對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
2)正常情況,本顯色液呈現(xiàn)無(wú)色或者淡藍(lán)色(OD650nm<0.04)。若是出現(xiàn)渾濁,或者顏色明顯很藍(lán),應(yīng)停止使用。
3)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
4)本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用方法
1) 使用之前,取出適量單組份TMB顯色液,使其回到室溫再開(kāi)始使用;
2) 對(duì)于ELISA檢測(cè):參考ELISA 檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟,當(dāng)加入HRP標(biāo)記的抗體并孵育一段時(shí)間后,用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次,每次3-5min。洗滌完畢后,去除洗滌液,加入200μl TMB顯色液。
對(duì)于在96孔板內(nèi)進(jìn)行的其他適當(dāng)檢測(cè)(如檢測(cè)組織或細(xì)胞樣品內(nèi)源性過(guò)氧化物水平):直接在96孔板內(nèi)加入10-20μl 樣品,之后加入200μl TMB顯色液;
3) 室溫避光孵育3-30min或更長(zhǎng)時(shí)間(可長(zhǎng)達(dá)24h),直至顯色至預(yù)期深淺(此時(shí)反應(yīng)液為藍(lán)色)。
4) 加入50μl 2M H2SO4終止反應(yīng),溶液由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,隨后在450nm測(cè)定吸光度。或直接在370nm或652nm測(cè)定吸光度。
常見(jiàn)問(wèn)題
1. 背景顯色太深
1)如果背景(沒(méi)有樣品的對(duì)照)顯色太深,一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉,如商業(yè)化的封閉液或者商業(yè)化的和一抗相同來(lái)源的血清(5-10%)進(jìn)行封閉。另一方面,直接使用經(jīng)過(guò)適當(dāng)親和吸附的二抗,以減小二抗的非特異性交叉吸附。
2)可以考慮縮短顯色時(shí)間,或降低二抗?jié)舛?。另外,選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液,或延長(zhǎng)洗滌時(shí)間也會(huì)有所幫助。
3)可考慮TMB底物本身反應(yīng)過(guò)于強(qiáng)烈。為了避免沉淀的產(chǎn)生,可在終止反應(yīng)后馬上讀數(shù),或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。
2. 沒(méi)有顯色或顯色太弱
1)適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測(cè)二抗效果,滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi),檢測(cè)二抗是否被正常顯色。
2)可以考慮使用更加靈敏的放大檢測(cè)體系,例如使用 素檢測(cè)體系。
3)可以適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間。
4)如果上述改進(jìn)不能獲得預(yù)期效果,可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。