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40905ESCoelenterazine 400a 腔腸素 400a
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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40905ES 產(chǎn)品型號(hào)
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | 40905ES02 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
Coelenterazine 400a 腔腸素400a
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
Coelenterazine 400a 腔腸素 400a | 40905ES02 | 1×500μg | -20℃避光 | 789.00 |
Coelenterazine 400a 腔腸素400a | 40905ES03 | 2×500μg | -20℃避光 | 1499.00 |
背景描述
腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源zui豐富的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過(guò)75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，比如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。其發(fā)光原理是：以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下，氧化腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，并在此過(guò)程中發(fā)射藍(lán)色光，峰值發(fā)射波長(zhǎng)約為450~480nm。
腔腸素作為水母發(fā)光蛋白復(fù)合物（Aequorin）的組成成分，只有與鈣離子（Ca2+）結(jié)合后，才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時(shí)釋放出CO2和藍(lán)色熒光（~466nm）。其具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：1）能檢測(cè)較大范圍的Ca2+濃度（0.1-100μM）；2）樣品無(wú)自體熒光，背景熒光較低，盡管信號(hào)較熒光鈣離子指示劑弱，但信噪比更高，因此具有較高靈敏度；3）Aequorin能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi)，能夠進(jìn)行數(shù)小時(shí)至數(shù)天Ca2+的監(jiān)測(cè)。
圖1. 腔腸素作為水母發(fā)光蛋白輔助因子的Ca2+依賴反應(yīng)流程
腔腸素具有能量轉(zhuǎn)移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔腸素存在的情況下，熒光素酶（如Rluc）催化底物發(fā)生藍(lán)光，能量轉(zhuǎn)移到EYFP（增強(qiáng)的黃色熒光蛋白），發(fā)出綠光（~530nm）。通過(guò)Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者間的相互關(guān)系研究蛋白-蛋白之間的相互作用。BRET的信號(hào)可通過(guò)比較綠光和藍(lán)光的量來(lái)進(jìn)行測(cè)定，消減了因細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞類型和其他實(shí)驗(yàn)變量而引起的數(shù)據(jù)變量。
主要應(yīng)用
1. 活體成像。
2. 報(bào)告基因檢測(cè)。
3. 檢測(cè)細(xì)胞/組織內(nèi)活性氧（ROS）水平：細(xì)胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子能夠增強(qiáng)腔腸素在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光。
4. 高通量篩選。
5. 監(jiān)測(cè)活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。
產(chǎn)品描述
Coelenterazine 400a 腔腸素 400a系天然腔腸素衍生物，是海腎熒光素酶（Rluc）的良好底物，但不能被Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc）氧化。它的zui大發(fā)射波長(zhǎng)在400nm左右，對(duì)GFP受體蛋白的信號(hào)干擾zui小，使得其成為BRET研究的*腔腸素類底物。
產(chǎn)品性質(zhì)
英文別名（English synonym） | DeepBlueCTM; Di-dehydro Coelenterazine |
CAS號(hào)（CAS NO.） | 70217-82-2 |
分子式（Formula） | C26H21N3O |
分子量（Molecular weight） | 391.48g/mol |
外觀（Appearance） | 黃色至橘色粉末 |
溶解性（Solubility） | 溶于甲醇和乙醇，不溶于DMSO |
純度（Purity）（TLC） | >98% |
結(jié)構(gòu)（Structure） |
|
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。粉末-20℃避光干燥保存，保存在惰性氣體環(huán)境下，避免接觸空氣。
腔腸素400a工作液的配制
腔腸素400a溶解特性：不溶于水。目前毒性zui低的溶劑是100%乙醇，可配制濃度為0.1-1mg/ml。加入pH低于7.0的酸性緩沖液（堿性pH會(huì)快速降解底物）稀釋成低濃度工作液。切忌溶于DMSO。
腔腸素400a保存特性：建議溶液現(xiàn)配現(xiàn)用！體外實(shí)驗(yàn)，需將稀釋后的工作液室溫放置20-30min，方可穩(wěn)定工作。該工作液可室溫穩(wěn)定放置3-4h，有非常微弱的信號(hào)衰減發(fā)生。不建議儲(chǔ)存液-20℃或更低溫度保存，因?yàn)槠涓吣芰康亩醐h(huán)丁酮結(jié)構(gòu)即使在低溫的情況下也會(huì)發(fā)生降解，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度明顯變?nèi)?。短時(shí)間保存條件：-70℃避光保存于塑料管內(nèi)（溶液中不含有Ca2+），且有惰性氣體保護(hù)。
腔腸素工作液的配制：稱取1mg腔腸素400a粉末溶解于1ml乙醇（或甲醇）中配置成濃度為1mg/ml的母液。用商業(yè)化的Rluc反應(yīng)緩沖液稀釋到300µM（如127µl母液+1ml Rluc反應(yīng)緩沖液）。然后取1.1ml 300µM溶液加入到6.6ml PBS中，混勻。
BRET 生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)發(fā)生變動(dòng)）
詳細(xì)步驟可參考文獻(xiàn)：Gersting SW, et al. Bioluminescence resonance energy transfer:an emerging tool for the detection of protein-protein interaction in living cells. Methods Mol Biol. 815:253-63 (2012)。
本步驟以Rluc的融合蛋白作為能量供體，YFP的融合蛋白作為能量受體，兩者同時(shí)電轉(zhuǎn)化進(jìn)入細(xì)胞，并通過(guò)加載腔腸素400a底物來(lái)啟動(dòng)氧化反應(yīng)，通過(guò)分析兩者BRET信號(hào)來(lái)研究?jī)蓚€(gè)蛋白之間的相互作用。
1. 按照正常流程將能表達(dá)兩個(gè)融合蛋白的質(zhì)粒，按照3:1的比例（YFP : Rluc）共電轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞。
2. 轉(zhuǎn)染后24h進(jìn)行BRET信號(hào)的檢測(cè)。吸去培養(yǎng)液（留約30μl）后，將96孔板放到熒光酶標(biāo)儀上。
3. 至少在測(cè)定前15min準(zhǔn)備腔腸素400a工作液。
4. 用超純水清洗注射泵后，讓泵開始自動(dòng)吸取配制好的400a工作液，按照每孔70µl工作液的量順序加入，使得每孔中底物的終濃度為30µM。進(jìn)樣結(jié)束后，孵育2min。之后立即進(jìn)行雙波長(zhǎng)熒光信號(hào)讀數(shù)，即Rluc信號(hào)（485nm）和BRET信號(hào)（535nm）。
BRET信號(hào)值計(jì)算
為了能夠進(jìn)行數(shù)據(jù)評(píng)估，轉(zhuǎn)染細(xì)胞的Rluc信號(hào)（485nm）應(yīng)當(dāng)超過(guò)非轉(zhuǎn)染對(duì)照細(xì)胞的（平均值+9×標(biāo)準(zhǔn)誤差）的區(qū)間。
1. BRET–ratio（BRET信號(hào)比）基于以下等式進(jìn)行計(jì)算，
R=（IA/ID）-cf
R代表BRET比值，ID表示受體YFP熒光信號(hào)的強(qiáng)度（535nm），IA表示供體Rluc熒光信號(hào)的強(qiáng)度（485nm），cf表示校準(zhǔn)因子（BRETcontrol/Rluccontrol D），對(duì)照樣本是指共轉(zhuǎn)染YFP融合蛋白質(zhì)粒和不含供體第二個(gè)研究蛋白的Rluc載體的細(xì)胞熒光信號(hào)。
2. 陽(yáng)性對(duì)照，使用YFP-Rluc融合蛋白的BRET比值為1.0。
3. 若蛋白之間有陽(yáng)性反應(yīng)，必須檢測(cè)到：8組蛋白樣本中至少有一組能夠產(chǎn)生超過(guò)設(shè)定閾值0.1以上的BRET信號(hào)比值。
注意事項(xiàng)
1. 粉末使用惰性氣體（氮?dú)饣驓鍤猓?/span>密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，長(zhǎng)期保存于-70℃。管內(nèi)即使存在少量空氣，可能造成腔腸素cp氧化失活，造成在不同試驗(yàn)間的量化分析結(jié)果無(wú)法比較。
2. 本品接觸空氣，水或者任何氧化試劑會(huì)不穩(wěn)定。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
附錄1. 腔腸素及其衍生物的特性
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 基本描述 | Em (nm) | RLC* | Relative Intensity | Half-rise time (ms)** |
40904 | 天然腔腸素 Coelenterazine native | 水母發(fā)光蛋白的輔助因子，高靈敏度化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)Ca2+濃度（0.1~100µM）。常用作Rluc和Gluc等熒光素酶的報(bào)告基因檢測(cè)底物。BRET分析，以及細(xì)胞/組織樣本中的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)?？焖僭偕芰Ρ容^重要的實(shí)驗(yàn)推薦使用本底物。 | 466 | 1.00 | 1 | 6-30 |
40906 | 腔腸素h Coelenterazine h | 一種水母發(fā)光蛋白復(fù)合物，其發(fā)光強(qiáng)度比天然腔腸素高10倍以上。適用于報(bào)告基因分析。 | 466 | 0.75 | 16 | 6-30 |
40910 | 腔腸素hcp Coelenterazine hcp | 腔腸素hcp-水母發(fā)光蛋白復(fù)合物的熒光強(qiáng)度比天然腔腸素復(fù)合物高190倍，且量子產(chǎn)量高和Ca2+反應(yīng)速度快。 | 445 | 0.65 | 500 | 2-5 |
40909 | 腔腸素cp Coelenterazine cp | Coelenterazine cp 光蛋白復(fù)合物的發(fā)光強(qiáng)度是天然腔腸素的15倍，且具有更快的Ca2+反應(yīng)性。 | 442 | 0.63 | 28 | 2-5 |
40908 | 腔腸素f Coelenterazine f | 腔腸素f-光蛋白復(fù)合物的發(fā)光強(qiáng)度是天然腔腸素的20倍。其具有的細(xì)胞滲透性。當(dāng)需要*的檢測(cè)Ca2+靈敏度研究水母蛋白再生實(shí)驗(yàn)研究中，推薦使用本底物。 | 472 | 0.80 | 20 | 6-30 |
40911 | 腔腸素n Coelenterazine n | 所有的腔腸素衍生物中熒光強(qiáng)度是zui弱的，且對(duì)Ca2+反應(yīng)速率也明顯低于天然腔腸素。非常有用的Ca2+低靈敏檢測(cè)底物。 | 468 | 0.25 | 0.15 | 6-30 |
40912 | 腔腸素e Coelenterazine e | 具有zui高的體外水母發(fā)光蛋白反應(yīng)性，且具有雙發(fā)射峰，可在pCa5-7范圍內(nèi)通過(guò)雙波長(zhǎng)的比例測(cè)定Ca2+濃度，從而提高檢測(cè)精確性。腔腸素e的熒光強(qiáng)度是天然腔腸素的137%。 | 405 & 465 | 0.5 | 4 | 0.15-0.3 |
40913 | 2-methyl Coelenterazine 二甲基腔腸素 | 可高效作用于ROS（如單態(tài)氧、超氧陰離子），是一種已報(bào)道的強(qiáng)抗氧化劑。 | / | / | / | / |
40905 | 腔腸素 400a Coelenterazine 400a | BRET研究中Rluc的*底物。在390nm和400nm之間發(fā)藍(lán)色光，對(duì)GFP受體蛋白的光發(fā)射干擾zui小。不可作為Gluc底物。 | 400 | / | / | / |
*RLC = relative luminescence capacity : Total time-integrated emission of aequorin in saturating Ca2+ relative to native aequorin = 1.0 **Half-Rise Time : The half-rise time is the time for the luminescence signal to reach 50% of the maximum after addition of 1mM Ca2+ to a standard of aequorin reconstituted with the coelenterazine analog of interest. All data are from O. Shimomura in Cell Calcium 14, 373 (1993). | ||||||
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Coelenterazine Native 天然腔腸熒光素火爆 | 40904ES02 | 1×500μg | 589.00 |
40904ES03 | 2×500μg | 1049.00 | |
40904ES08 | 5mg | 3899.00 | |
Coelenterazine 2-methyl 二甲基腔腸素 | 40913ES72 | 1×50μg | 929.00 |
Coelenterazine h 腔腸素h | 40906ES02 | 1×500μg | 1329.00 |
40906ES03 | 2×500μg | 2359.00 | |
40906ES08 | 5mg | 6759.00 | |
Ready To Use Coelenterazine h 即用型腔腸素h火爆 | 40907ES10 | 10 vials | 6856.00 |
Coelenterazine f 腔腸素f | 40908ES02 | 1×500μg | 1329.00 |
40908ES03 | 2×500μg | 2359.00 | |
Coelenterazine cp 腔腸素cp | 40909ES72 | 1×250μg | 2359.00 |
Coelenterazine hcp 腔腸素hcp | 40910ES72 | 1×250μg | 2359.00 |
Coelenterazine n 腔腸素n | 40911ES72 | 1×250μg | 2359.00 |
Coelenterazine e 腔腸素e | 40912ES02 | 1×500μg | 1329.00 |
40912ES03 | 2×500μg | 2359.00 |
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