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Bradford蛋白濃度測定試劑盒
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1467更新時間：2023-02-24 16:20:35
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 一周 | 貨號 | 20202ES76 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
Bradford Protein Quantification Kit
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
Bradford Protein Quantification Kit | 20202ES76 | 500T | 4℃ | 98.00 |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | 20202ES86 | 2500T | 4℃ | 398.00 |
產(chǎn)品描述
Bradford蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據(jù)Bradford染液（考馬斯亮藍(lán)G-250染料）與蛋白結(jié)合，使染料的zui大吸收峰從A456變?yōu)?/span>A595，且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關(guān)系的原理設(shè)計的。本法通過吸光值，推算蛋白濃度，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高，比Lowry法大約高四倍，zui低蛋白檢測量可達(dá)1μg。測定速度快、簡單，僅需一種試劑即可，且不受大多數(shù)樣品中化學(xué)試劑的影響。
我司提供二種規(guī)格的Bradford蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做125次和625次。酶標(biāo)法分別可做500次和2500次。
產(chǎn)品組分
編號 | 組分 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | |
20202ES76 (500T) | 20202ES86 (2500T) | ||
20202-A | Bradford蛋白染色液 | 125ml | 5×125 ml |
20202-B | 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA） | 5×1ml（2mg/ml） | 5×2ml（2mg/ml） |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。
染色液4℃保存，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品常溫或4℃保存，有效期一年。
注意事項(xiàng)
1）Bradford染色液使用前，應(yīng)充分混勻。同時，酶標(biāo)儀需預(yù)熱20min。
2）Bradford染色液需恢復(fù)到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。另，使用前需顛倒幾次以充分混勻。
3）由于Bradford染液的顏色反應(yīng)并不是同遞增的蛋白濃度呈線性關(guān)系，因此每次試驗(yàn)都必須建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。另外，為了得到更精確的結(jié)果，每個蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔。
4）Bradford法測定蛋白濃度對大多數(shù)化學(xué)物質(zhì)的兼容性比較好，比如對還原劑DTT的兼容性高達(dá)5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。對于含去垢劑的樣品，建議使用BCA增強(qiáng)型蛋白定量檢測試劑盒【貨號：20201ES76】。
5）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
操作方法
一、配制標(biāo)準(zhǔn)品
1. 配制BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系
【注】：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進(jìn)行稀釋。
BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制可參考表一。
表一BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系配制（微孔板檢測，線性范圍100-1500μg/ml）
Vial | 稀釋液體積(μl) | 2mg/ml BSA體積(μl) | BSA終濃度(μg/ml) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
二、檢測方法
A. 標(biāo)準(zhǔn)比色皿檢測（線性范圍：100-1500μg/ml）
1）各取20μl不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到反應(yīng)管中；
2）加入1ml Bradford染色液，混勻。室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；
3）分光光度計上測定595nm處的吸光度，用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。
4）根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即zui終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度μg/ml；Y-zui終的OD595nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。
B. 標(biāo)準(zhǔn)微孔板檢測（線性范圍：100-1500μg/ml）
1）各取5μl各濃度標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到微孔板中；
2）每孔加入250μl Bradford染色液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，室溫孵育10min?！咀ⅰ浚簶颖臼覝胤跤龝r間不可超過1h；
3）酶標(biāo)儀上測定595nm處的吸光度?；蛘咂渌?/span>575~615nm波長范圍內(nèi)的吸光度，但是相對于595nm，吸光度會存在~10%的損失。
4）根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即zui終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度μg/ml；Y-zui終的OD595nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。
【注】：a）由于酶標(biāo)板的光徑比比色皿短，經(jīng)酶標(biāo)板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得，因此可能降低本法的檢測下限。要得到更高的OD595nm，可使用7-10μl標(biāo)準(zhǔn)品/待檢樣本，和250μl Bradford染色液來進(jìn)行檢測。b）如果使用與酶標(biāo)儀相關(guān)的曲線擬合算法（curve fitting algorithm），那么四參數(shù)或者*擬合曲線可能得到更為精確的結(jié)果，并不是單純的線性擬合。若是手動標(biāo)記各點(diǎn)濃度，點(diǎn)-點(diǎn)曲線出來的結(jié)果精確于線性擬合。若對結(jié)果準(zhǔn)確性的要求不是非常嚴(yán)格，可使用線性擬合分析數(shù)據(jù)。
附錄
表：Brandford蛋白濃度測定的兼容性
名稱（鹽/緩沖液） | 耐受濃度 |
ACES, pH 7.8 | 100mM |
Ammonium sulfate | 1M |
Asparagine | 10mM |
Bicine, pH 8.4 | 100mM |
Bis-Tris, pH 6.5 | 100mM |
Borate (50mM), pH 8.5 | undiluted |
Calcium chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2M), pH 9.4 | undiluted |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHES, pH 9.0 | 100mM |
Na-Citrate (0.6M), Na-Carbonate (0.1M), pH 9.0 | undiluted |
Na-Citrate (0.6M), MOPS (0.1M), pH 7.5 | undiluted |
Cobalt chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
EPPS, pH 8.0 | 100mM |
Ferric chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Glycine | 100mM |
Guanidine?HCl | 3.5M |
HEPES, pH 7.5 | 100mM |
Imidazole, pH 7.0 | 200mM |
MES, pH 6.1 | 100mM |
MES (0.1M), NaCl (0.9%), pH 4.7 | undiluted |
MOPS, pH 7.2 | 100mM |
Nickel chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
PBS; Phosphate (0.1M), NaCl (0.15M), pH 7.2 | undiluted |
PIPES, pH 6.8 | 100mM |
RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,0.5% DOC, 1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0 | 1/10 dilution* |
Sodium acetate, pH 4.8 | 180mM |
Sodium azide | 0.5% |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium chloride | 5.0M |
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 | 200mM |
Sodium phosphate | 100mM |
Tricine, pH 8.0 | 100mM |
Triethanolamine, pH 7.8 | 100mM |
Tris | 2M |
TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15M), pH 7.6 | undiluted |
Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0 | undiluted |
Tris (25mM), Glycine (192mM), SDS (0.1%), pH 8.3 | 1/2 dilution* |
Zinc chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
名稱（變性劑） | 耐受濃度 | 還原劑以及巰基試劑 | 耐受濃度 |
Brij?-35 | 0.125% | Dithiothreitol (DTT) | 5mM |
Brij-56, Brij-58 | 0.031% | Glucose | 1M |
CHAPS, CHAPSO | 5.0% | Melibiose | 100mM |
Deoxycholic acid | 0.05% | 2-Mercaptoethanol | 1M |
Lubrol? PX | 0.125% | Potassium thiocyanate | 3M |
Octyl β-glucoside | 0.5% | Thimerosal | 0.01% |
Nonidet P-40 (NP-40) | 0.5% | Misc. Reagents & Solvents | 耐受濃度 |
Octyl β-thioglucopyranoside | 3.0% | Acetone | 10% |
SDS | 0.125% | Acetonitrile | 10% |
Span? 20 | 0.5% | Aprotinin | 10mg/L |
Triton? X-100, X-114 | 0.125% | DMF, DMSO | 10% |
Triton X-305, X-405 | 0.5% | Ethanol | 10% |
Tween?-20 | 0.062% | Glycerol (Fresh) | 10% |
Tween-60 | 0.1% | Hydrochloric Acid | 100mM |
Tween-80 | 0.062% | Leupeptin | 10mg/L |
Zwittergent? 3-14 | 0.025% | Methanol | 10% |
螯合劑 | 耐受濃度 | Phenol Red | 0.5mg/mL |
EDTA | 100mM | PMSF | 1mM |
EGTA | 2mM | Sodium Hydroxide | 100mM |
Sodium citrate | 200mM | Sucrose | 10% |
還原劑以及巰基試劑 | 耐受濃度 | TLCK | 0.1mg/L |
N-acetylglucosamine in PBS, pH 7.2 | 100mM | TPCK | 0.1mg/L |
Ascorbic acid | 50mM | Urea | 3M |
Cysteine | 10mM | o-Vanadate (sodium salt), in PBS, pH 7.2 | 1mM |
Dithioerythritol (DTE) | 1mM |
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