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產品簡介
產品介紹
Protein G Agarose Beads 4FF 快速蛋白G瓊脂糖珠
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
Protein G Agarose Beads 4FF 快速蛋白G瓊脂糖珠 | 36406ES08 | 5ml | 4℃ | 978.00 |
36406ES25 | 25ml | 4℃ | 3186.00 | |
36406ES60 | 100ml | 4℃ | 8726.00 |
產品描述
天然蛋白G（Protein G）是一種分離自G型或C型鏈球菌屬的細胞表面蛋白，與發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌的細胞壁表面的蛋白A類似，主要通過與免疫球蛋白（Ig）的Fc區(qū)相互作用，結合大多數(shù)哺乳動物的IgG，可用于多種抗體（單抗和多抗）的分離純化。在與不用的免疫球蛋白亞類的結合特性上，ProteinA 和Protein G結合性能不太一樣，相比ProteinA， ProteinG 對牛、羊、馬等多克隆抗體有更強的結合力，它還可以結合不能與ProteinA很好結合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1（詳見附錄1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白G，不僅維持其本身的Ig親和特性，同時也去除了天然蛋白本身的非主要結合域以降低非特異性結合，Protein G Agarose Resin 4FF以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質，重組Protein G為配基，具有很高的物理化學穩(wěn)定性，可以在相對較高的流速下進行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶。利用本品經過一步親和層析，即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應用廣泛。
產品性質
基質（Matrix） | 高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 重組蛋白G |
孔徑（Bead size） | 45-165µm |
zui大流速（Flowmax） | 0.3MPa,3bar |
儲存緩沖液（Buffer） | 含20%乙醇的1×PBS |
載量（Capacity） | ＞30mg human IgG/ml 基質 |
pH范圍（pH range） | 3-10 |
運輸與保存方法
冰袋運輸。4℃保存，2年有效。
需準備試劑
【注】：建議以下緩沖液在使用前用0.22μm或0.45μm濾膜過濾。
結合/洗雜緩沖液：0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脫緩沖液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】：上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用結合/洗滌緩沖液對血清樣品、腹水或細胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用結合/洗滌緩沖液透析。
1 Protein G Agarose Resin 4FF的裝填
1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去離子水。
2）將樹脂懸浮起來，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。
3）如果使用儲液器，應立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進樣管中產生氣泡。
4）打開層析柱底部出口，開起泵，使其在設定的流速下進行。zui初應讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至zui終流速， 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可以用所使用泵的zui大流速，這樣也可以得到一個很好的裝填效果。
【注】：在隨后的色譜程序中，不要超過zui大裝柱流速的75%，當柱床高度穩(wěn)定后，在zui后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標上柱床高度。
5）關閉泵，關閉層析柱出口。
6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器至于層析柱中。
7）將分配器推向柱子至標記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器，鎖緊分配器接頭。
8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開始平衡。如果需要可以重新調整分配器。
2 樣品純化
1）平衡：用5倍柱體積的結合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
2）上樣：將樣品加到平衡好的Protein G Agarose Resin 4FF中，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
3）洗雜： 用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
4）洗脫： 使用 5-10 倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，zui后再用5倍柱體積的 20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細菌污染。
3 SDS-PAGE檢測
將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。
4 樹脂清洗
隨著一些變性物質的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量下降，影響柱子的性能，這時需對柱子進行清洗：
1）去除沉淀或變性物質
① 用2倍柱體積的6M 鹽酸胍溶液進行清洗；
② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質
① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™X-100清洗；
② 用5倍柱體積的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事項
1）請勿冷凍保存本產品。
2）Protein G瓊脂糖珠使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
附錄1. 蛋白A，G對不同物種Ig的結合能力總表
免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G | 免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G |
Human IgG | ++++ | ++++ | Mouse IgG | ++++ | ++++ |
Human IgG1 | ++++ | ++++ | Mouse IgG1 | + | ++++ |
Human IgG2 | ++++ | ++++ | Mouse IgG2a | ++++ | ++++ |
Human IgG3 | + | ++++ | Mouse IgG2b | +++ | +++ |
Human IgG4 | ++++ | ++++ | Mouse IgG3 | ++ | +++ |
Human IgM | Use anti-Human IgM | Mouse IgM | Use anti-Mouse IgM | ||
Human IgE | NR | NR | Chicken IgG (IgY) | NR | NR |
Human IgA | + | NR | Cow IgG | ++ | ++++ |
Human IgA1 | + | NR | Goat IgG | + | ++++ |
Human IgA2 | + | NR | Goat IgG1 | + | ++++ |
Human IgD | Use anti-Human IgD | Goat IgG2 | ++++ | ++++ | |
Rat IgG | + | ++ | Goat IgM | NR | NR |
Rat IgG1 | NR | + | Guinea Pig IgG | ++++ | ++ |
Rat IgG2a | NR | ++++ | Guinea Pig IgG1 | ++++ | ++ |
Rat IgG2b | NR | + | Guinea Pig IgG2 | ++++ | ++ |
Rat IgG3 | + | ++ | Hamster IgG | + | ++ |
Sheep IgG | + | ++ | Horse IgG | + | ++++ |
Sheep IgG1 | + | ++ | Rabbit IgG | ++++ | +++ |
Sheep IgG2 | + | ++ | Rabbit IgM | NR | NR |
Sheep IgM | NR | NR | Rabbit All isotypes | +++ | ++ |
Pig IgG | +++ | +++ | Monkey IgG | ++++ | ++++ |
Cat IgG | ++++ | + | Donkey IgG | ++ | ++++ |
Dog IgG | ++++ | + |
|
|
|
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; | |||||
附錄2 常見問題與解答
問題 | 可能原因 | 推薦解決方法 |
柱子反壓過高 | 篩板被堵塞 | 清洗或更換篩板 |
填料被堵塞 | 清洗填料 | |
裂解液中含有微笑的固體顆粒，建議上柱前使用0.22µm/0.45µm濾膜過濾。 | ||
樣品純化過程中曲線不穩(wěn) | 樣品或 buffer 中有氣泡 | 趕出氣泡 |
樣品和buffer進行脫氣 | ||
洗脫組分中沒有目的蛋白 | 樣品中抗體濃度太低 | 使用其抗原做配體的介質 |
抗體被降解 | 適當?shù)奶岣呦疵?/span>pH | |
樣品與Protein G結合力低 | 換用Protein A或Protein A/G樹脂純化 | |
回收率逐漸減低 | 上樣量太多 | 減少上樣量 |
柱子太臟，載量降低 | 清洗樹脂 |
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