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潮霉素B(Hygromycin B) 氨基糖苷類抗生素
| 參考價(jià): | ￥ 719 |
| 訂貨量: | 1 件 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
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訪問(wèn)次數(shù)：991更新時(shí)間：2023-02-24 13:29:39
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 1 g |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 60225ES03 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
產(chǎn)品介紹
潮霉素B(Hygromycin B) 氨基糖苷類抗生素
產(chǎn)品描述
潮霉素B(Hygromycin B) 氨基糖苷類抗生素是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來(lái)源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來(lái)篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Geneticin)，Zeocin和Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽(yáng)性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(hào)（CAS NO.） | 31282-04-9 |
分子式（Formula） | C20H37N3O13 |
分子量（Molecular Weight） | 527.52 g/mol |
外觀（Appearance） | 白色至淡黃色至褐色粉末 |
純度（Purity） | ＞90% by HPLC |
溶解性（Solubility） | 易溶于水 |
活力（Potency） | ≥1050 U/mg |
結(jié)構(gòu)式（Structure） |
|
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃干燥保存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1. 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來(lái)自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3.本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
1. 儲(chǔ)存液的配制（50 mg/mL）
稱取0.5 g 潮霉素B加入10 mL 1×PBS，PH 7.4，充分溶解后用0.22 μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成單次使用的小量（如1 mL）放到-20℃凍存，1年穩(wěn)定。
2. 常用篩選濃度
潮霉素B用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定篩選濃度。一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞：50-500 μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞：20-200 μg/mL；真菌：300-1000μg/mL。
3. 殺滅曲線的建立
【注意事項(xiàng)】：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素zui低濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線來(lái)實(shí)現(xiàn)，建議至少選擇5個(gè)濃度。
1）第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜。
【注】：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2）根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/mL，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
終濃度（μg/mL） | 培養(yǎng)基體積（mL） | 5 mg/mL潮霉素B加入體積（mL） |
50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
3）第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4）接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5）按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的zui低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
4.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1）轉(zhuǎn)染48 h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
【注】：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果好。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%。
2）每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3）篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4）挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35 mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5）之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
相關(guān)產(chǎn)品推薦：
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B（50 mg/mL） | 60224ES03 | 1 g (20 mL) | 849.00 |
Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B（50 mg/mL） | 60224ES10 | 10×1 g (20 mL) | 7396.00 |
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