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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10148ES10 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè) |
| 主要用途 | 基因克??；復雜DNA模板擴增；高通量建庫 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 DNA Polymerase | 10148ES10 | 10 U | 103.00 |
10148ES60 | 100 U | 683.00 | |
10148ES76 | 500 U | 2383.00 | |
10148ES80 | 1000 U | 4583.00 |
產品描述
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶 DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經基因工程改造而成。該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了熱啟動因子，極大提高了擴增的檢出率和產物的特異性。酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力，擴增速度達到15 sec/kb，擴增目的片段的長度可長達10 kb。本產品配備了優(yōu)化緩沖液，添加了PCR增強組分，使得該酶適用于復雜模板的擴增。擴增產物為平末端。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編碼/規(guī)格 | |||
10148ES10 （10U） | 10148ES60 （100U） | 10148ES76 （500U） | 10148ES80 （1000U） | ||
10148-A | Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) | 5 μL | 50 μL | 250 μL | 250 μL×2 |
10148-B | 2×Canace® Gold PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） | 300 μL | 1 mL×3 | 1 mL×15 | 1 mL×30 |
產品應用
基因克隆；復雜DNA模板擴增；高通量建庫。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精DNA為模板/引物，74℃，30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1 U。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg IL23R質粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2）本產品僅作科研用途！
推薦PCR反應體系（冰上配制）
組分 | 體積 | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
2×Canace® Gold PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 μL | 1× |
DNA模板 | 適量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL) | 0.5 μL | 1 U/50 μL |
【注】：
1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μL?？梢栽?.5-2 U/50 μL之間進行優(yōu)化，請勿超過2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應體系中。
4）Mg2+終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
5）高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴增。
6）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：
模板種類 | 擴增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50ng-200 ng |
質?；虿《綝NA | 10pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超過PCR反應總體積的1/10) |
PCR擴增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序
兩步法程序（優(yōu)先推薦）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
三步法程序（常規(guī)程序）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
梯度溫度退火程序（難擴增基因推薦程序）:
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | 1 |
預變性 | 預變性 | 預變性 | 15，每個循環(huán)降低1℃ |
變性 | 變性 | 變性 | |
退火 | 退火 | 退火 | |
延伸 | 延伸 | 延伸 | 20 |
終延伸 | 終延伸 | 終延伸 | |
循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | |
預變性 | 預變性 | 預變性 | 1 |
【注】：
1）預變性溫度和時間：推薦溫度：98℃，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦溫度：60℃，也可根據(jù)需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節(jié)。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦溫度：72℃。時間：30 sec/kb，復雜模板根據(jù)實際情況可延長至60 sec/kb。
4）擴增產物：請將PCR擴增產物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴增產物。擴增產物為平末端。
5）不同擴增程序下的特點：
程序類型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特異性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR產量 | 中等 | 最高 | 中等 |
檢出率 | 高 | 中等 | 高 |
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產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
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HB210923
