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11195ES03qPCR預(yù)混液(qPCR SYBR Green Master Mix)
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 11195ES03 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：1869更新時(shí)間：2022-11-07 16:45:11
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1 ml |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 11195ES03 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
Hieff UNICON® qPCR預(yù)混液(qPCR SYBR Green Master Mix) (抗體法，No Rox) | 11195ES03 | 1 ml | 383.00 | 223.00 |
11195ES08 | 5×1 ml | 1653.00 | 663.00 | |
11195ES50 | 10×5 ml | 12533.00 | 6613.00 | |
11195ES60 | 20×5 ml | 19833.00 | 12563.00 |
產(chǎn)品描述
qPCR預(yù)混液(qPCR SYBR Green Master Mix)是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增的預(yù)混合溶液。具有高特異性和高檢出率的特點(diǎn)。采用的抗體法熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶，在預(yù)變性溫度（95℃）加熱30 sec，急速釋放出Taq DNA Polymerase活性。UNICON® Taq抗體可以有效抑制樣品準(zhǔn)備過(guò)程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增。同時(shí)配方額外添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的組分和均衡不同GC含量（30%-70%）基因擴(kuò)增的促進(jìn)因子。使定量PCR結(jié)果可以在寬廣范圍內(nèi)更加真實(shí)有效。
預(yù)混液含有所有PCR擴(kuò)增的組分。使用時(shí)，僅需在擴(kuò)增體系中加入模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，大大簡(jiǎn)化操作過(guò)程，降低污染幾率。
運(yùn)輸與保存方式
冰袋運(yùn)輸。-20℃避光儲(chǔ)存，有效期18個(gè)月。
本品避免反復(fù)凍融。產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存或配制反應(yīng)體系時(shí)需避免強(qiáng)光照射。
注意事項(xiàng)
1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號(hào)：11123ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
2. 產(chǎn)品解凍后如果發(fā)現(xiàn)不溶物，請(qǐng)上下顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
反應(yīng)體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積（μl） | 體積（μl） | 終濃度 |
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法，No Rox) | 25 | 10 | 1× |
Forward Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
模板DNA | X | X | - |
無(wú)菌超純水 | to 50 | to 20 | - |
【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
a) 引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。
b) 模板濃度：如模板類型為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的1/10。
c) 模板稀釋：cDNA原液建議5-10倍稀釋，最佳模板加入量以擴(kuò)增得到的CT值在20-30個(gè)循環(huán)為好。
d) 反應(yīng)體系：推薦使用20 μl或50 μl，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無(wú)核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
擴(kuò)增程序（兩步法） 擴(kuò)增程序（三步法）
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | 循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | |
預(yù)變性 | 95℃ | 30sec | 1 | 預(yù)變性 | 95℃ | 30sec | 1 | |
變性 | 95℃ | 10sec | 40 | 變性 | 95℃ | 10sec | 40 | |
退火/延伸 | 60℃ | 30sec★ | 退火 | 55-60℃ | 20sec | |||
熔解曲線階段 | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 | 延伸 | 72℃ | 20sec★ | |||
熔解曲線階段 | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 | ||||||
【注】：高特異性可選擇兩步法，高效率擴(kuò)增可選擇三步法。
a) 預(yù)變性時(shí)間：本反應(yīng)條件適合大多數(shù)基因擴(kuò)增，如果遇到含有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的基因可適當(dāng)增加預(yù)變性時(shí)間至3-5 min。
b) 退火溫度和時(shí)間：請(qǐng)根據(jù)引物和目的基因的長(zhǎng)度進(jìn)行調(diào)整。
c) 熒光信號(hào)采集（★）：請(qǐng)按照儀器使用說(shuō)明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置，幾種常見(jiàn)儀器的時(shí)間設(shè)定如下：
30sec以上：Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31sec以上：Applied Biosystems: 7300
34sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
結(jié)果分析
定量實(shí)驗(yàn)至少需要三個(gè)生物學(xué)重復(fù)。反應(yīng)結(jié)束后需要確認(rèn)擴(kuò)增曲線及熔解曲線。
1) 擴(kuò)增曲線：標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線為S型。
Ct值落在20-30之間時(shí)，定量分析最準(zhǔn)確；
Ct值小于10，需要將稀釋模板后，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
Ct值介于30-35之間時(shí)，需要提高模板濃度，或者增大反應(yīng)體系的體積，以提高擴(kuò)增效率，保證結(jié)果分析的準(zhǔn)確性；
Ct值大于35時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無(wú)法定量分析基因的表達(dá)量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲線：
熔解曲線單峰，表明反應(yīng)特異性好可以進(jìn)行定量結(jié)果分析；若熔解曲線出現(xiàn)雙峰或者多峰，則不能進(jìn)行定量分析。
熔解曲線出現(xiàn)雙峰，需要通過(guò)DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標(biāo)峰是引物二聚體還是非特異性擴(kuò)增。
如果是引物二聚體，建議降低引物濃度，或者重新設(shè)計(jì)擴(kuò)增效率高的引物。
如果是非特異性擴(kuò)增，請(qǐng)?zhí)岣咄嘶饻囟?，或者重新設(shè)計(jì)更高特異性的引物。
引物設(shè)計(jì)指南
1）推薦引物長(zhǎng)度25 bp左右。擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度150 bp為佳，不要低于100 bp，可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
2）正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過(guò)2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
3） 引物堿基分布要均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個(gè)相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個(gè)堿基最好為G或C。
4）引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。
5）引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對(duì)。避免引物3’端有2個(gè)堿基以上的非特異性互補(bǔ)。
6）設(shè)計(jì)完成的引物需要進(jìn)行擴(kuò)增效率的檢測(cè)，只有具備相同擴(kuò)增效率的引物才可用于定量比較分析。
適用機(jī)型
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
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