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        1. 翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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          11197ES03qPCR預混液 qPCR SYBR Green Mix
          參考價: 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準
          • 11197ES03 產(chǎn)品型號
          • Yeasen/翌圣生物 品牌
          • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
          • 上海市 所在地

          訪問次數(shù):926更新時間:2022-11-07 16:42:24

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          聯(lián)人:
          曹女士
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          真:
          86-21-34615995
          址:
          上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號3樓
          網(wǎng)址:
          www.yeasen.com

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          產(chǎn)品簡介
          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1ML
          貨號 11197ES03 應用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)
          qPCR預混液 qPCR SYBR Green Mix是實時定量PCR擴增的預混合溶液。具有高特異性和高檢出率的特點。采用的抗體法熱啟動Taq DNA聚合酶,在預變性溫度(95℃)加熱30 sec,急速釋放出Taq DNA Polymerase活性。
          產(chǎn)品介紹
          • 產(chǎn)品名稱

            產(chǎn)品名稱

            產(chǎn)品編號

            規(guī)格

            價格(元)

            *(元)

            Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix(抗體法,High Rox)

            qPCR預混液 qPCR SYBR Green Mix

            11197ES03

            1 ml

            383.00

            223.00

            11197ES08

            5×1ml

            1653.00

            663.00

            11197ES50

            10×5 ml

            12533.00

            6613.00

            11197ES60

            20×5 ml

            19833.00

            12563.00


            產(chǎn)品描述


            本產(chǎn)品是2×實時定量PCR擴增的預混合溶液。具有高特異性和高檢出率的特點。采用的抗體法熱啟動Taq DNA聚合酶,在預變性溫度(95℃)加熱30 sec,急速釋放出Taq DNA Polymerase活性。UNICON® Taq抗體可以有效抑制樣品準備過程中引物退火導致的非特異性擴增。同時配方額外添加了有效抑制非特異性PCR擴增的組分和均衡不同GC含量(30%-70%)基因擴增的促進因子。使定量PCR結(jié)果可以在寬廣范圍內(nèi)更加真實有效。

            預混液含有所有PCR擴增的組分。使用時,僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行實時熒光定量PCR,大大簡化操作過程,降低污染幾率。


            運輸與保存方式

            冰袋運輸。-20℃避光儲存,有效期18個月。

            本品避免反復凍融。產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I,保存或配制反應體系時需避免強光照射。

            注意事項

            1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒(貨號:11123ES),以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。

            2. 產(chǎn)品解凍后如果發(fā)現(xiàn)不溶物,請上下顛倒混勻至溶液澄清,不影響試劑性能。

            3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
             4. 本產(chǎn)品僅作科研用途!

            反應體系(推薦冰上配制)

            組分

            體積(μl)

            體積(μl)

            終濃度


            Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法,High Rox)

            25

            10

            Forward Primer (10 μM)

            1

            0.4

            0.2 μM

            Reverse Primer (10 μM)

            1

            0.4

            0.2 μM

            模板DNA

            X

            X

            -

            無菌超純水

            to 50

            to 20

            -

            【注】:使用前務必充分混勻,避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
            a) 引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進行調(diào)整。
            b) 模板濃度:如模板類型為未稀釋cDNA原液,使用體積不應超過qPCR反應總體積的1/10。
            c) 模板稀釋:cDNA原液建議5-10倍稀釋,最佳模板加入量以擴增得到的CT值在20-30個循環(huán)為好。
            d) 反應體系:推薦使用20 μl或50 μl,以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
            e) 體系配制:請于超凈工作臺內(nèi)配制,并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管;推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。


            擴增程序(兩步法)

            擴增程序(三步法)

            循環(huán)步驟

            溫度

            時間

            循環(huán)數(shù)

            循環(huán)步驟

            溫度

            時間

            循環(huán)數(shù)

            預變性

            95℃

            30 sec

            1

            預變性

            95℃

            30 sec

            1

            變性

            95℃

            10 sec

            40

            變性

            95℃

            10 sec

            40

            退火/延伸

            60℃

            30 sec★

            退火

            55-60℃

            20 sec

            熔解曲線階段

            儀器默認設(shè)置

            1

            延伸

            72℃

            20 sec★

            熔解曲線階段

            儀器默認設(shè)置

            1


            【注】:高特異性可選擇兩步法,高效率擴增可選擇三步法。
            a) 預變性時間:
            本反應條件適合大多數(shù)基因擴增,如果遇到含有復雜結(jié)構(gòu)的基因可適當增加預變性時間至3-5 min。
            b) 退火溫度和時間:請根據(jù)引物和目的基因的長度進行調(diào)整。
            c) 熒光信號采集(★):請按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設(shè)置,幾種常見儀器的時間設(shè)定如下:
            30 sec以上:Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast;Roche Applied Science: LightCycler 480;Bio-Rad: CFX96
            31 sec以上:Applied Biosystems: 7300
            34 sec以上:Applied Biosystems: 7500
            d) 熔解曲線:通常情況下可以使用儀器默認程序。


            結(jié)果分析

            定量實驗至少需要三個生物學重復。反應結(jié)束后需要確認擴增曲線及熔解曲線。

            1) 擴增曲線:標準擴增曲線為S型。
                Ct值落在20-30之間時,定量分析最準確;
                Ct值小于10,需要將稀釋模板后,重新進行實驗;
                Ct值介于30-35之間時,需要提高模板濃度,或者增大反應體系的體積,以提高擴增效率,保證結(jié)果分析的準確性;
                Ct值大于35時,檢測結(jié)果無法定量分析基因的表達量,但可用于定性分析。

            2) 熔解曲線:
                熔解曲線單峰,表明反應特異性好可以進行定量結(jié)果分析;若熔解曲線出現(xiàn)雙峰或者多峰,則不能進行定量分析。
                熔解曲線出現(xiàn)雙峰,需要通過DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標峰是引物二聚體還是非特異性擴增。
                如果是引物二聚體,建議降低引物濃度,或者重新設(shè)計擴增效率高的引物。
                如果是非特異性擴增,請?zhí)岣咄嘶饻囟?,或者重新設(shè)計更高特異性的引物。


            引物設(shè)計指南

            1)推薦引物長度25 bp左右。擴增產(chǎn)物長度150 bp為佳,不要低于100 bp,可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。

            2)正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。

            3)引物堿基分布要均勻,避免出現(xiàn)連續(xù)的4個相同堿基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。

            4)引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個堿基以上的互補序列。

            5)引物特異性需要用NCBI BLAST程序進行核對。避免引物3’端有2個堿基以上的非特異性互補。

            6)設(shè)計完成的引物需要進行擴增效率的檢測,只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。


            適用機型

            Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT FAST, StepOne, StepOne Plus


            相關(guān)產(chǎn)品

            產(chǎn)品名稱

            貨號

            規(guī)格

            Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit  (gDNA digester plus)

            11121ES60

            100 T

            Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus)

            11123ES60

            100 T

            Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )

            11201ES08

            5 mL

            Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus)

            11202ES08

            5 mL

            Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus)

            11203ES08

            5 mL

            Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,No Rox)

            11195ES08

            5 mL

            Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,Low Rox)

            11196ES08

            5 mL

            Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,High Rox)

            11197ES08

            5 mL

            Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,No Rox)

            11198ES08

            5 mL

            Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,Low Rox)

            11199ES08

            5 mL

            Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,High Rox)

            11200ES08

            5 mL


            HB210824




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