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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
10149ES012×Hieff Canace® 高保真酶預(yù)混液
| 參考價(jià): | ￥ 93 |
| 訂貨量: | 1 件 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 10149ES01 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1143更新時(shí)間：2022-11-21 10:23:27
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100UL |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 10149ES01 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
2×Hieff Canace® 高保真酶預(yù)混液信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 | 10149ES01 | 100 μL | 93.00 |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 | 10149ES03 | 1 mL | 553.00 |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 | 10149ES08 | 5×1 mL | 1453.00 |
| 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 | 10149ES50 | 50×1ml | 11655.00 |
| 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶預(yù)混液 | 10149ES60 | 100×1ml | 21655.00 |
2×Hieff Canace® 高保真酶預(yù)混液描述
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預(yù)混液是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系。預(yù)混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的熱啟動(dòng)因子，極大提高了擴(kuò)增的檢出率和產(chǎn)物的特異性。預(yù)混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增目的片段的長度可長達(dá)10 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。擴(kuò)增速度可達(dá)15 sec/kb。適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進(jìn)行擴(kuò)增，簡化了實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)省了時(shí)間。本產(chǎn)品中不含染料，PCR產(chǎn)物需加入Loading buffer后進(jìn)行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產(chǎn)品應(yīng)用
基因克??；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）解凍后Master Mix可能出現(xiàn)晶體沉淀，使用前務(wù)必渦旋振蕩混勻至沉淀消失，不影響試劑性能。
2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）
組分 | 體積 | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板 | 適量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix | 25 μL | 1× |
【注】：
1）聚合酶終濃度：在1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP終濃度：在1×預(yù)混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：
模板種類 | 擴(kuò)增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質(zhì)?；虿《綝NA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
PCR擴(kuò)增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序。
兩步法程序（優(yōu)先推薦）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
三步法程序（常規(guī)程序）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
梯度溫度退火程序（難擴(kuò)增基因推薦程序）:
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 15，每個(gè)循環(huán)降低1℃ |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
變性 | 98℃ | 10 sec | 20 |
正常退火 | 55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：
1）預(yù)變性溫度和時(shí)間：推薦溫度：98℃，時(shí)間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時(shí)間：推薦溫度：60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時(shí)間：推薦溫度：72℃。時(shí)間：30 sec/kb，復(fù)雜模板根據(jù)實(shí)際情況可延長至60 sec/kb。
4）擴(kuò)增產(chǎn)物：請(qǐng)將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
5）不同擴(kuò)增程序下的特點(diǎn)：
程序類型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特異性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR產(chǎn)量 | 中等 | 最高 | 中等 |
檢出率 | 高 | 中等 | 高 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶 | 10148ES60/76/80 | 100/500/1000 U |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒HOT | 10909ES20 | 20 T |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點(diǎn)） | 10910ES20 | 20 T |
一步法快速克隆試劑盒HOT | 10911ES20 | 20 T |
多片段一步法快速克隆試劑盒HOT | 10912ES10 | 10 T |
定點(diǎn)突變?cè)噭┖蠬OT | 11003ES10 | 10 T |
多點(diǎn)突變?cè)噭┖蠬OT | 11004ES10 | 10 T |
