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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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41304ES60E.coli殘留DNA檢測試劑盒
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 41304ES60 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：660更新時間：2022-07-07 15:32:26
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- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 41304ES60 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中的CHO殘留DNA含量的試劑 |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留檢測試劑盒 | 41304ES50 41304ES60 | 50T 100T | 8895.00 16425.00 |
產(chǎn)品描述
E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中的E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留片段含量的試劑盒。
本試劑盒采用PCR熒光探針原理，專一快速的檢測E.coli細(xì)胞的殘留DNA，其檢測限可以達(dá)到fg平。試劑盒配套有E.coli DNA Control（DNA定量參考品）。本試劑盒需要與磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒（Cat#18461/18462）配套使用。
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | |
41304ES50（50T） | 41304ES60（100T） | ||
41304-A | E.coli qPCR mix | 0.9 mL | 1.8 mL |
41304-B | E.coli Primer&probe mix | 100 μL | 200 μL |
41304-C | DNA Dilution Buffer | 2×2 mL | 4×2 mL |
41304-D | E.coli DNA Control（30 ng/μL） | 25 μL | 50 μL |
【注】：適用機型（包含但不限于以下儀器）：
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
Thermo Scientific：ABI 7500；ABI QuantStudio 5；ABI StepOnePlus；
上海宏石醫(yī)療科技：SLAN-96S.
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃儲存，有效期2年。收到貨后，建議將D組分E.coli DNA Control儲存于－80℃，其它組分儲存于－20℃。
注意事項
1. 加樣和配液步驟盡量都在冰上操作。
2. 每個組分在使用前都應(yīng)充分震蕩混勻，低速離心。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
使用方法
一、E.coli DNA Control的稀釋和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的DNA Dilution Buffer將E.coli DNA Control進(jìn)行梯度稀釋，稀釋濃度依次為 300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL。
具體操作如下：
1. 將試劑盒中的E.coli DNA Control和 DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待*融化后，輕微振蕩混勻，低速離心10 sec。
2. 取6支干凈的1.5 mL離心管，分別標(biāo)記為 3 ng/μL，①，②，③，④，⑤。
3. 在標(biāo)記為3 ng/μL的1.5 mL離心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL E.coli DNA Control，即稀釋為 3 ng/μL，振蕩混勻后短時間快速離心10 sec，該濃度可分裝置于－80℃短期保存（不超過3個月），使用時避免反復(fù)凍融。
4. 在①，②，③，④，⑤管中先分別加入90 μL DNA Dilution Buffer，再進(jìn)行梯度稀釋，稀釋方法如下：
稀釋管 | 稀釋比例 | 終濃度 |
① | 10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 pg/μL |
② | 10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 pg/μL |
③ | 10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer | 3 pg/μL |
④ | 10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 fg/μL |
⑤ | 10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 fg/μL |
【注】：1. 每個濃度做3個復(fù)孔。該試劑可測試30 fg/μL-3 ng/μL線性范圍，如需要，可擴(kuò)大或縮小線性范圍。
2. 為減少反復(fù)凍融次數(shù)和避免污染，建議初次使用時將DNA定量參考品分裝儲存于－80℃。
3. 已融化未使用的DNA Dilution Buffer可保存于2-8℃ 7天，如長時間不用請放置于－20℃。
4. 為確保模板*混勻，每個梯度稀釋時需震蕩混勻1 min以上。
二、加樣回收質(zhì)控QC的制備
根據(jù)需要設(shè)QC中的E.coli DNA加樣濃度（以制備加3 pg/μL DNA量的樣本QC為例），具體操作如下：
取100 μL待測樣本加入1.5 mL干凈的離心管中，再加入10 μL②，混勻，標(biāo)記為加樣回收QC。
加樣回收QC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備加樣回收QC純化液。
三、標(biāo)準(zhǔn)品回收質(zhì)控QC的制備（可選）
根據(jù)需要設(shè)QC中的E.coli DNA標(biāo)準(zhǔn)品濃度（以加3 pg/μL DNA 標(biāo)準(zhǔn)品為例），具體操作如下：
取100 μL 3 pg/μL定量參考品的稀釋液加入1.5 mL干凈的離心管中，標(biāo)記為標(biāo)準(zhǔn)品回收QC。
標(biāo)準(zhǔn)品QC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備標(biāo)準(zhǔn)品QC純化液。
四、陰性質(zhì)控NC的制備
根據(jù)實驗設(shè)置陰性質(zhì)控，具體操作如下：
取100 μL樣本基質(zhì)溶液（或DNA Dilution Buffer）加入1.5 mL干凈的離心管中，標(biāo)記為陰性質(zhì)控NC。
陰性質(zhì)控NC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理，制備成陰性質(zhì)控NC純化液。
五、反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） |
E.coli qPCR mix | 18 |
E.coli Primer&probe mix | 2 |
DNA template | 20 |
總體積 | 40 |
【注】：1. 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次所需的 qPCR MIX 總量：qPCR MIX =（反應(yīng)孔數(shù)+2）×40 μL（含有2孔的損失量）。實驗中每一個樣品模板最好重復(fù)做3個以上。
2. 加樣完成密封好管子后，請先低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底，再震蕩混勻5 sec以上，*混勻反應(yīng)液，再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底，如有氣泡，需將氣泡排盡。
下圖為參考板位：
該示例表示的是檢測6個濃度梯度的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線、1個無模板對照NTC、3個陰性質(zhì)控NC、3個待測樣本、3個加樣回收QC和3個標(biāo)準(zhǔn)品回收QC。每個檢測做3個重復(fù)孔。
六、擴(kuò)增程序參數(shù)設(shè)置（兩步法）（以ABI公司7500 qPCR儀、軟件版本2.0為例）
創(chuàng)建空白新程序，選擇絕對定量檢測模板。
創(chuàng)建1個檢測探針，命名為E.coli-DNA，選擇報告熒光基團(tuán)為FAM，猝滅熒光基團(tuán)為none。
在Assign target (s) to the selected wells面板中，將標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的Task一欄設(shè)置為Standard，并且在Quantity 一欄分別賦值為300000、30000、3000、300、30（含義為每孔的DNA濃度，單位為fg/μL），并且在相應(yīng)的sample name一欄中命名為300 pg/μL，30 pg/μL，3 pg/μL，300 fg/μL，30 fg/μL；將無模板對照NTC孔的Task一欄設(shè)置為NTC；將陰性質(zhì)控NC孔、待測樣本孔、樣本QC孔的Task一欄設(shè)置為Unknown，并且在相應(yīng)的Sample Name一欄中命名為NTC、NC、YP、QC，之后點擊 。
4. 擴(kuò)增程序設(shè)置：設(shè)置反應(yīng)體積40 μL。
循環(huán)步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min | 1 |
變性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
退火/延伸（收集熒光） | 60℃ | 30 sec |
七、qPCR 結(jié)果分析
在 Analysis的Amplification Plot面板中，系統(tǒng)會自動給出Threshold，有時系統(tǒng)給出的Threshold離基線太近，導(dǎo)致復(fù)孔之間Ct相差甚遠(yuǎn)，可手動調(diào)節(jié)Threshold至合適位置，點擊Analyze。此時可在Multicomponent Plot初步查看擴(kuò)增曲線的形態(tài)是否正常。
2. 在Analysis的Standard Curve面板中，可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（Slope）、截距（Intercept）、R2、擴(kuò)增效率（Eff%）。正常的標(biāo)曲，R2＞0.99；90%≤Eff%≤110%。
3. 在Analysis的View well table面板中，Quantity一欄可讀取無模板對照NTC、陰性質(zhì)控NCS、待測樣本、樣本ERC的檢測值，單位為fg/μL，后續(xù)可在檢測報告中將單位換算成pg/μL或pg/mL。
HB220322
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