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所在地：YEASEN
貨物所在地：上海上海市
更新時間：2024/11/3 21:00:08
訪問次數(shù)：415
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Cell Counting Kit（CCK-8）試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES60* | 100 T | 150.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES76* | 500 T | 480.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES80* | 1000 T | 920.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES88* | 3×1000 T | 1833.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES92* | 10×1000 T | 5122.00 |
檢測原理
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
CCK-8法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
保存條件
4℃干燥避光保存，有效期一年（推薦）。-20℃干燥避光保存，有效期二年。
CCK-8方法的優(yōu)勢
1）表1 CCK-8法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較
檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
甲臜產(chǎn)物的水溶性 | 差（需加有機(jī)溶劑溶解后再檢測） | 好 | 好 | 好 |
產(chǎn)品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
使用方法 | 配成溶液后使用 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 即開即用 | 即開即用 |
檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | 短 |
檢測波長 | 560-600 nm | 420-480 nm | 420-480 nm | 430-490 nm |
細(xì)胞毒性 | 高，細(xì)胞形態(tài)*消失 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 | 很低，細(xì)胞形態(tài)不變 |
試劑穩(wěn)定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
2）酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；
3）細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到*測定時間。
注意事項
1）建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
2）有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾OD值讀數(shù)。
3）白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
4）如果沒有450 nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度zui高。
5）培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
6）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
CCK-8試劑盒操作說明
一. 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量）
1、先用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞到培養(yǎng)板內(nèi)。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個細(xì)胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)2-4小時使細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)1-4 h后測定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X軸），OD值為縱坐標(biāo)（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要*，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。）
【注】當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時，貼壁細(xì)胞的小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
二. 細(xì)胞活性檢測
1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100 μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時間（37℃，5% CO2）。
2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
4、用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。
5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
三. 細(xì)胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中配制100 μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）。
2、向培養(yǎng)板中加入10 μL不同濃度的待測物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。
4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
6、用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。
7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
【注】如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
活力計算
細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
HB190726
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