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翌圣生物科技（上海）股份有限

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供應(yīng)簡介

GMyc-PCR支原體檢測試劑盒主要采用PCR方法對各種生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物、動(dòng)物血清等）支原體感染的檢測。它綜合了幾個(gè)優(yōu)勢：靈敏、特異、快速并且可以用直接用細(xì)胞培養(yǎng)上清液檢測。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品簡介：

GMyc-PCR支原體檢測試劑盒主要采用PCR方法對各種生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物、動(dòng)物血清等）支原體感染的檢測。它綜合了幾個(gè)優(yōu)勢：靈敏、特異、快速并且可以用直接用細(xì)胞培養(yǎng)上清液檢測。本制品通過PCR方法檢測培養(yǎng)細(xì)胞等生物材料中的支原體，所用引物為根據(jù)支原體16S-23S rRNA序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)，只特異性擴(kuò)增支原體DNA，檢出靈敏度與特異性均較高。PCR擴(kuò)增及電泳分析只需數(shù)個(gè)小時(shí)，操作方便簡單。

產(chǎn)品組分及保存：

1.試劑盒包裝清單：

試劑名	保存條件	容量	貨號(hào)
GMyc-1st PCR Mix	-20℃	500µl	GM-83599-1
GMyc-1st PCR Mix	-20℃	1ml（2×500µl）	GM-83599-2

注1：長期不用時(shí)，可-80℃冷凍保存。

注2：PCR反應(yīng)極其靈敏，為防止假陽性，加樣時(shí)，zui后加陽性對照。

2.試劑盒以外自備實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：

器材	試劑
PCR儀	瓊脂糖
PCR反應(yīng)管	GelRed或EB
電泳儀及水平電泳槽	去離子水或雙蒸水
離心機(jī)
微量移液器及移液器吸頭

實(shí)驗(yàn)流程：

此PCR反應(yīng)為巢式PCR，*輪PCR結(jié)束后，取其反應(yīng)產(chǎn)物為第二輪PCR模板。根據(jù)兩輪PCR產(chǎn)物電泳條帶之有無及片段大小來分析結(jié)果。貼壁細(xì)胞培養(yǎng)3-6天后，直接取其上清液進(jìn)行PCR反應(yīng)。為排除細(xì)胞培養(yǎng)基抑制PCR反應(yīng)，陽性對照中需加入等量的細(xì)胞上清液。懸浮細(xì)胞不能作為樣品直接檢測，會(huì)干擾PCR反應(yīng)，需提取DNA并進(jìn)行PCR。

*輪PCR：

1.充分融解Myco-1st PCR Mix，按下列表格配制反應(yīng)液：

試劑	實(shí)驗(yàn)組	陽性對照	陰性對照
Myco-1st PCR Mix	46µl	46µl	46µl
樣品 ddH₂O	4µl	4µl	4µl
Positive Control Template^注¹		1µl

注1：為防止Positive Control Template污染，請將實(shí)驗(yàn)組和陰性對照組加完以后，zui后再將

Positive Control Template加入陽性對照組。

2.按下列條件進(jìn)行PCR反應(yīng):

94℃	3 min
94℃	30 s	30~35 cycles
55℃	2 min
72℃	1 min
72℃	10 min

第二輪PCR：

1. 充分融化引物及PCR Mix，按下列表格配制反應(yīng)液：

試劑	實(shí)驗(yàn)組	陽性對照	陰性對照
Myco-2nd PCR Mix	24µl	24µl	24µl
1st PCR反應(yīng)液	1µl	1µl	1µl

2.按下列條件進(jìn)行PCR反應(yīng)：

94℃	3 min
94℃	30 s	30~35 cycles
55℃	2 min
72℃	1 min
72℃	10 min

反應(yīng)結(jié)束后，取10 μl 的PCR反應(yīng)液進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，確認(rèn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

推薦使用頻率：

新細(xì)胞進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室	必檢
液氮保存前	必檢
定期常規(guī)	每月檢測一次
發(fā)現(xiàn)污染后	每周檢測一次
發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常	隨時(shí)檢測

注意事項(xiàng)：

1. 使用本試劑前請仔細(xì)閱讀本說明書全文。

2. 操作時(shí)應(yīng)盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個(gè)檢測過程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行，以避免交叉污染。

3. 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時(shí)禁止激烈振蕩，只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻）。

4. 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，以免形成過多的二聚體。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測靈敏度，建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測。

6. 為了您的健康，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。

訂購信息

貨號(hào)	名稱	產(chǎn)地	規(guī)格	報(bào)價(jià)	*（元）
GM-83599-1	GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒	Genomeditech	10 assays	1120	896
GM-83599-2	GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒	Genomeditech	20 assays	1764	1411

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