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供應(yīng)簡介

用于體外分離外周血淋巴細(xì)胞，也可以從其他來源中分離單核細(xì)胞，包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞。

詳細(xì)介紹

用途：

用于體外分離外周血淋巴細(xì)胞，也可以從其他來源中分離單核細(xì)胞，包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞。

方法概述：

早期分離白細(xì)胞的方法，會用一種化合物混合血液。此化合物能夠聚集紅細(xì)胞，只輕微影響白細(xì)胞。通過離心，紅細(xì)胞由于密度增加而聚集沉淀，同時從離心管內(nèi)上層收集白細(xì)胞。

Böyum提出了一種更方便快速的分離方法，即以Ficoll^®-甲泛影鈉溶液為介質(zhì)進(jìn)行離心。稀釋的血液在Ficoll-甲泛影鈉溶液中分層，之后低速短時離心。紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞沉降到管底，單個核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞）和血小板可以從兩個分層間的分界面處收集。

許多研究者不斷改進(jìn)了Böyum方法，對于MP生物醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的LSM，其方法的*之處在于成功運(yùn)用泛影酸鈉代替了甲泛影鈉。

程序原理：

去纖維蛋白或肝素化人血以1：1的比例用生理鹽水或平衡鹽溶液稀釋，在分離溶液中分層，低速離心30min。離心過程中，由于差速遷移zui終形成不同的細(xì)胞層。

聚集在管底的顆粒主要是紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞，它們通過梯度遷移至管底。由于其密度不同，淋巴細(xì)胞和其他單個核細(xì)胞（單核細(xì)胞和血小板）分布在血漿和LSM兩層之間。淋巴細(xì)胞可以通過吸取分界層溶液回收，zui后進(jìn)一步清洗去除血小板，LSM和血漿。

試劑：

LSM^® 是一種濾膜過濾除菌的溶液，每100ml包含6.2g聚蔗糖和9.4g泛影酸鈉。20℃下密度是1.0770-1.0800g/ml。

使用說明：

以下的操作步驟是zui初由Böyum.設(shè)計(jì)的程序中眾多改良版本的一種。此程序經(jīng)改良用于去纖維蛋白或抗凝血劑處理過的人體血液；對于其他物種或者其他組織的血液，改變此程序也許是有必要的。

1. 輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合

2. 無菌轉(zhuǎn)移3 ml LSM到15 ml離心管中。

3. 混合2 ml去纖維蛋白血液或肝素化血液和2 ml 生理鹽水

4. 仔細(xì)的將稀釋血液加入含有3 ml LSM（室溫）的15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。

5. 室溫下400xg離心15-30min，離心可以沉淀紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞，同時可以在LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞，如上圖所示（具體分層情況為血漿層-單個核細(xì)胞層-LSM層-RBC顆粒）。

6. 吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。

7. 吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM，并轉(zhuǎn)移到另外一個離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至離心管內(nèi)的淋巴細(xì)胞層中，室溫（18-25°C）離心10分鐘，離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻，例如160 – 260 xg（清洗去除LSM，并降低血小板的百分比）。

8. 再用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞，zui后用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞?！?/span>

訂購信息：相當(dāng)于sigma公司的Histopaque^®-1077產(chǎn)品

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廠家說明

MP Biomedicals生物醫(yī)學(xué)公司是位于美國加利福尼亞州的生命科學(xué)和生物技術(shù)廠商。2004年底成功收購Qbiogene、ICN，現(xiàn)在有5個大型倉庫，能夠及時供應(yīng)各行業(yè)需求，亞洲倉庫位于新加坡。它致力于生命科學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和探索。目前它提供55000多種產(chǎn)品，是世界上能全面提供生命科學(xué)產(chǎn)品和臨床診斷產(chǎn)品的幾家廠商之一。

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